艾滋病的实验室诊断方法.docVIP

科研方法学 班级：2008级研3班 学号：2008128 姓名：段治华 艾滋病的实验室诊断方法 段治华 （山西医科大学，太原030001） 摘要:艾滋病是由人类免疫缺陷病毒感染引起的传染病，实验室检测是诊断艾滋病的主要手段，检测项目包括HIV抗原和抗体检测，病毒载量检测，CD4T淋巴细胞检测，HIV耐药性检测，基因芯片技术的运用，病毒分离等。近年来，基于分子生物学和免疫学方法的发展，HIV的实验室检测有了较大的进步，为艾滋病的准确诊断提供可靠的方法。 关键词:艾滋病 HIV 实验室诊断 艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS) ，(human immunodeficiency virus，HIV) HIV的方法。 1 HIV结构特点 人类免疫缺陷病毒（HIV）外型呈球形或卵形，90～130nm，RNA 链，HIV属逆转录病毒，，gag-pol-env。Gag基因编码55KD的前体蛋白，，pol基因编码的蛋白酶加工，P17、核壳蛋白P24和核酸结合蛋白P15 。P24是核壳组成蛋白，，，HIV-1型的特异性蛋白。在HIV-2与P24对应的是主要核心抗原P32，HIV-2型病毒感染的特异标志。Env编码包膜蛋白，gp120和跨膜糖蛋白gp41组成(在HIV-2型病毒中与之相当的是gp110/ 130和gp36) [1]。 2 HIV抗原检测 检测P24抗原可作为早期特异性诊断，因为在HIV感染的早期，HIV抗体，P24抗原常以低水平出现，但是该抗原检出率远比HIV 抗体为低，HIV 抗原出现不久即可产生抗体，，HIV活动性感染的标志。P24抗原检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫(RIA)、免疫荧光技术(IFA)、免疫吸附电镜(ISEM)等，其中ELISA操作简单、经济、省时高效的实验方法，具有良好的敏感度和特异度 [2]。HIV抗原检测的灵敏度约50% ～ 80%，所以该结果只能作为HIV 感染的辅助诊断依据[3]。 3 HIV抗体检测 3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA为HIV抗体初筛最常用的筛检方法，其试剂已经发展到第4代[3]。 3.2 凝胶颗粒凝集试验（PA） 此法快速、简便，适合对少量标本的检测，但是灵敏度和准确性不如ELISA法[1]。 3.3 金标快速反应试验 将颗粒凝聚法的简便性和酶免疫测定(EIA)技术相结合，用于快速检测抗-HIV，特异性较好，试剂稳定，检测时不需要任何设备，快速简便，适用于应急检测以及边远地区检测[1]。 3.4 尿液HIV抗体检测 尿液检测已成为艾滋病检测的一种全新手段，在安全、便捷等方面更具优势。HIV感染者的尿液、唾液、精液及泪液中均含有HIV抗体，其HIV抗体主要成分为IgG[3]。 3.5 免疫斑点印迹试验（western blot，WBHIV检测的“金标准”。 是将HIV病毒蛋白通过十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的蛋白带分离开来,再把这些已经分离的不同蛋白转移到醋酸纤维素膜上,再将此膜切割成条状，每一条醋酸纤维素薄膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。待检血清样本用稀释液稀释成1∶100 ，把它直接加到醋酸纤维素膜上，恒温振荡，使其充分接触反应。血清中若含有抗-HIV，就会与膜条上的抗原结合，冲洗除去多余的抗体，再加入抗人-IgG酶结合物并孵育，经洗涤后加入底物，有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果[1]。 3.6免疫荧光 将HIV感染的细胞作为抗原固定在玻片上，滴加待检血清，若含有HIV抗体，则与细胞膜上的病毒抗原结合，清洗后加荧光标记的抗人IgG，细胞膜染色为HIV抗体阳性。此法操作简便，敏感性及特异性均较ELISA法高，但存在对某些血清非特异性荧光难以去除，结果判断需较高级的荧光显微镜等缺点[3]。 3.7放射免疫沉淀试验 用同位素标记的HIV蛋白与待检血清反应，若血清中含有HIV抗体即可与HIV蛋白抗原结合，再加入葡萄球菌蛋白A，经低速离心，然后将沉淀复合物分离后电泳，放射自显影观察同位素标记蛋白带即可判定。本法灵敏度和特异度均好，但因试剂制备复杂，成本高，且同位素操作需要严格防护而限制其应用[3]。 4 HIV 病毒载量检测 HIV病毒载量是指体内病毒复制的数量，一般以血清HIV-RNA表示，随着生物技术的发展，HIV病毒载量检测得到人们越来越多的重视，它可以直接检测HIV-RNA，可在发现血清学变化之前检测HIV感染，而且比P24抗原检测方法更灵敏，主要以RNA的拷贝数表示。检测方法有聚合酶链反应检测法，分枝DNA信号扩增检测法，核酸序列扩增实验[1]。 5 CD4T淋巴细胞计数 CD4T淋巴细胞是人体免疫系统最重要的细胞