从环境中分离放线菌的实验.pptVIP

* 从环境中分离放线菌实验 一组 制作小组： 一、实验目的 1、学习从土壤中分离放线菌的方法。 2、练习、掌握微生物接种、移植和培养的基本技术。掌握无菌操作技术。 3、掌握无菌操作技术。 二、实验原理 放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。 土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。用胆酸钠处理土壤悬液后土壤分散效果较好，且优于纯蒸馏水。这可能是因为胆酸钠对土壤腐殖质具有较强的结合能力从而有利于破坏土壤团聚结构。 重铬酸钾对土壤真菌、细菌的抑制作用较明显， 然而对放线菌并无抑制作用。而且其价格低廉。实验证明酵母膏、SDS（十二烷基硫酸钠）也有抑菌的作用。 三、实验材料 1、样品 干燥的营养基质丰富的苗圃土 2、仪器 铲子、牛皮纸、搪瓷杯、锥形瓶、玻璃棒、烧杯、小试剂瓶、标签纸、移液管、接种环、试管、记号笔、酒精灯、电子天平、电炉、恒温培养箱、加压蒸汽灭菌锅、电热干燥烘箱 培养基及试剂配制 （1）培养基（高氏一号琼脂+重酪酸钾培养基)配制: 配方：可溶性淀粉20g、K2HPO4 0.5g、1mol/LNaOH、MgSO4?7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4?7H2O 0.01g、琼脂20g、蒸馏水1000ml、250mg重酪酸钾、PH7.2~7.4。 步骤：用搪瓷杯先量取500ml自来水在电炉上加热。 称量FeSO4?7H2O 称量MgSO4?7H2O 称量可溶性淀粉10g 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 称量重酪酸钾 称量NaCl 称取K2HPO4 0.25g 用搪瓷杯先量取500ml自来水在电炉上加热。根据配方，依次称取各种药品加入搪瓷杯中，搅拌均匀。可溶性淀粉称入烧杯中，加入50ml自来水调成糊状，待培养液煮沸时加入淀粉糊，边加边搅拌，防止糊底。之后，加入琼脂煮沸至完全溶化，补足1000ml水量。接着，缓慢加入NaOH液，边加入边搅匀培养液，然后用PH试纸测其酸碱值，调PH至7.2~7.4。 趁热分装于8个三角瓶中，塞好棉塞。用牛皮纸包扎好，贴好标签。最后，高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min. 酵母膏 试剂配制： 1mol/LNaOH、6%酵母膏和用5 mmol / L 磷酸缓冲液稀释的0.05% SDS 称取磷酸 称量SDS 在苗圃，按对角交叉（五点法）取样。先出去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2~10cm处的土壤于叠好的牛皮纸袋里。 因取来的土里含有大量的树根草根，故需用筛子去除杂质。 将土样放入三角瓶中，加入少量胆酸钠，再加适量蒸馏水振荡溶解制成土壤悬浮液。调节稀释液的PH为7，略微加热后冷却至40℃。之后，再加6%酵母膏和用5 mmol / L 磷酸缓冲液稀释的0.05% SDS震荡20min。 注意：所取的土样不可过湿，防止样品中杂菌过多；至土壤稀释液时要振荡充分，是土样与水充分混合，将菌分散。 器材灭菌 无菌蒸馏水。 3个锥形瓶、培养皿12个、玻璃棒3个、移液枪1个、枪头12个、接种环1个、酒精灯1个、打火机1个 分离 方法：将处理后的土壤悬浮液稀释100倍备用。加热已制备并灭菌好的高氏合成1号琼脂+重酪酸钾培养基，在无菌条件下倒10个平板然后，贴好标签，冷却。用平板稀释法，稀释度从10-3到10-5,浓度将菌种接种在高氏合成1号琼脂+重酪酸钾的平板培养基上,28℃培养5~7d。 注意：稀释样品时要在无菌条件下进行；每个稀释度做3个培养皿，并做好标记；实验中要留一个空白对照；注意划线时不要将培养基划破，划线时将培养基画满，使菌种均匀分布在培养基上。 THANKS * * *