肌腱细胞类胰岛素生长因子21受体密度分析.PDF

·164 · Chinese J Rep arative and Reconstructive Sur gery , 1998 , Vol 12 (3) ·组织工程 · 肌腱细胞类胰岛素生长因子1 受体密度分析△ 1 1 2 3 3 杨志明 　项 　舟 　邹立群 　彭文珍 　魏大鹏 　　摘 　要 　　为了了解类胰岛素生长因子1 ( I GF1) 受体在不同代次体外培养的肌腱细胞的分 布 ,同时观察同一肌腱细胞周期中不同亚时相的 I GF1 受体数 目的差别 ,采用免疫组化和流式细 胞仪分析法 ,对体外培养的原代 、第 6 代和第 13 代肌腱细胞的 I GF1 受体密度进行了分析 ,并以第 6 代肌腱细胞为对象 ,进行了同一细胞周期不同亚时相的 I GF1 受体数 目差别分析 。结果表明 , I GF1受体在体外培养的原代 、第 6 代和第 13 代肌腱细胞的密度大体相同 ,而在同一细胞周期中 ( ) ( ) ( ) 分裂前期及分裂期 G M 期 的受体数 目比DNA 合成前期 G 期 的受体数 目多 P 0 . 0 1 。提 2 1 示 ,在肌腱细胞培养的传代过程中和在同一细胞周期的不同亚时相 ,肌腱细胞均维持一个相对稳 定的 I GF1 受体密度 。为组织工程人工肌腱的构建和肌腱细胞生长的调控提供了理论基础 。 关键词 　　类胰岛素生长因子1 　　受体密度 　　肌腱细胞 　　流式细胞仪 　　在肌腱细胞的培养中 ,我们发现从原代 细胞传代到第 13 代 ,肌腱细胞的增殖能力就 1 　材料与方法 变得十分低下 ,这种增殖能力的低下又能通 1. 1 　材料来源 肌腱取自水囊引产的5 月龄胎儿四肢 。F12 培养 过增加外源性类胰岛素生长因子1 (insulin ( ) 基系 Sigma 公司产品。新生小牛血清 FBS 系华西医 like growt h factor1 , I GF1) 得 到 部 分 补 科大学分子生物学研究室产品,经灭活过滤除菌及去 偿[ 1 ] 。这一效应 的产生 除 了外源性加入 支原体处理。IGF1 系Boehringer Mannheim Biochemica I GF1 因子外 ,细胞对该因子的响应是促成 产品。IGF1 受体的鼠单克隆抗体 ( α) 系 Santa IGF1 R 该效应的另一个重要方面 。许多对 I GF1 因 Cruz Biotechnology ,Inc. 产品。 子进行深入研究的报道都指出 , I GF1 的效 1. 2 　肌腱细胞的培养 应是通过模受体 - 配体模式产生的[2 ,3 ] , 即 按 Handerson[4 ] 分步酶消化法分离人胚腱细胞 。 对 I GF1 产生生物效应 的细胞都应该有 首先在手术放大镜下剪除肌腱外膜组织 , Hank ’s 液 I GF1 受体 。因此 ,肌腱细胞也具有