实验室基本技能培训课件.ppt

实验一实验基础知识/基本技能培训;实验基础知识/基本技能培训;目 录;前 言分子生物学实验规程;实验规程;实验规程;实验规程;实验规程;实验规程;实验要求;第一节分子生物学实验设备;分子生物学实验设备;温度控制系统;温度控制系统;实验用水 一次蒸馏水：水经过一次蒸馏，不挥发的组分残留在容器中被除去，挥发的组分（氨、二氧化碳、有机物）进入蒸馏水的初始馏分中，通常只收集馏分的中间部分，约占60％。 　 多次蒸馏水：在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾溶液，除去有机物和二氧化碳；加入非挥发性的酸（硫酸或磷酸），使氨成为不挥发的铵盐。 无（去）离子水：指除去了呈离子形式杂质后的纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法，应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子，但水中仍然存在可溶性的有机物。;实验用水 超纯水：既将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。 超纯水中除了水分子(H20)外，几乎没有什么杂质。 ? 各种用水，在贮存中都会被污染： 塑料容器会产生有紫外吸收的有机物； 玻璃和金属容器会产生金属离子的污染； 长时间放置更会使水长菌，空气中CO2会溶入水中。 所以贮存一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存在冰箱的冷藏室中；最好使用“新鲜的水”。;分子生物学实验用水 普通蒸馏水、二次蒸馏水、无/去离子水、超纯水。; 常用的灭菌方法：高温、高压灭菌、紫外线照射、火焰焚烧、过滤除菌、酒精等试剂浸泡消毒等，因此实验室必须配备各种无菌处理设备。 常用的灭菌仪器设备：高压灭菌锅、紫外灯、酒精灯、滤膜等。; 常用的定量系统有：称量系统、液体体积度量系统、pH测定系统、液体溶质定量系统等。 ⑴ 称量仪器：最常用的是电子天平。 ⑵ 酸碱度pH测量仪器：最常用的是pH试纸和pH计。;⑶液体体积度量仪器：常用的有各种量筒、移液管、容量瓶、移液器。; ⑷ 液体溶质定量仪器：主要有紫外分光光度计和可见分光光度计等。 ;实验用离心机分为制备性离心机和分析性离心机。 制备性离心??主要用于分离各种生物材料。 离心方法是分离和制备生物大分子最常用的手段。 制备性离心机可分为三类:低速、高速（冷冻）、超速离心机。; 电泳是生化实验中最常用最重要的实验技术之一，主要用于分析、鉴定，也可用于制备。 电泳装置由电泳仪和电泳槽两部分组成。 电泳仪：电泳时提供一定的电压和电流 电泳槽：凝胶电泳系统的核心部分，根据电泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场通过凝胶连接两个缓冲腔。; 电泳槽：核酸或蛋白质的电泳定性/定量分析时的凝胶支架。 电泳槽又分为水平电泳槽和垂直电泳槽。; 是分子生物学实验中的重要观测仪器，几乎全部的实验结果都需要经由凝胶成像系统来观察。 可用于观察分析各种透明或不透明的电泳图像，包括琼脂糖凝胶电泳检测DNA结果的观察、PCR产物的检测观察，垂直板凝胶电泳检测基因多态性的银染胶、蛋白胶、斑点印迹（RNA/蛋白质检测）结果的观察等。;紫外分析仪; PCR(Polymerase Chain Reaction)是指聚合酶链式反应。其反应是用DNA聚合酶在体外大量扩增DNA片段的一种方法。 PCR仪就是将此方法实现了自动化操作的一种仪器，是分子生物学实验常用和必备的设备。 PCR仪包括普通PCR仪、梯度PCR仪、荧光定量PCR仪。; 超净工作台 恒温培养箱; 蛋白电泳槽和转印槽-用于western-blotting实验; 酶标仪-用于ELISA （酶联免疫吸附实验）实验。; 实验室除以上常规设备和设施外，还必须装备下列一些常用设备： A.通风柜：用于有害和有毒气体的操作。 B.组织打碎机和匀浆器：用于各种生物材料、动植物组织和细胞的破碎。（研钵） C. 超声清洗机：用于各种器皿、移液管和自动取液器吸头的清洗和高效液相色谱仪所用流动相的脱气等。;其它设备 ;H.基因导入仪：用于向受体生物细胞中导入基因。常用的导入仪有：电导入仪、基因枪、激光和超声导入仪、原生质体融合仪等。 I.高效液相色谱仪和毛细管电泳仪：用于各种生物大分子的分析与鉴定。;第二节分子生物学基本技术;分子生物学基本技术;1) 温度控制系统;1) 温度控制系统;1) 温度控制系统;1) 温度控制系统;1) 温度控制系统;分子生物学基本技术;3) 消毒系统;分子生物学基本技术;4) 计量系统-质量;4) 计量系统-体积;移液器使用方法及注意事项:;移液器使用方法及注意事项:;移液器使用方法及注意事项:;分子生物学基本技术; 一般在低速离心时（转速小于5000 r/mi