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5`-RACE(Takara)课件
宝生物工程（大连）有限公司, 116600 TaKaRa Biotechnology (Dalian) Co., Ltd.;目 的;报 告 内 容;实验使用的主要试剂;●Self-Ligation 法;5’ RACE 的实验方法;体外转录PSPtet RNA。 配制PSPtet RNA和人总RNA的混合样品。 设计合成5条引物。 使用5’ RACE法获取PSPtet RNA的5’末端。 切胶回收目的DNA片段。 进行DNA测序确认序列结果。;PSPtet RNA 体外转录;PSPtet RNA的电泳结果;RNA Mixture 的配制;人总 RNA的电泳结果;;五条引物与PSPtet RNA的位置关系图;5条引物的详细序列;体外转录PSPtet RNA。 配制PSPtet RNA和人总RNA的混合样品。 设计合成5条引物。 使用5’ RACE法获取PSPtet RNA的5’末端。 切胶回收目的DNA片段。 进行DNA测序确认序列结果。;5’ RACE 的实验方法;Step1. 反转录反应;Step2. Hybrid RNA的分解;Step3. 单链 cDNA 的自身连接反应;Step4. PCR 反应 (1st PCR);Step4. PCR 反应 (2nd PCR);2nd PCR反应结果;●切胶回收电泳结果如下;Step6. DNA ???段的序列测定;未知 序列;; 使用 RNA Ligase 的 5’ RACE 法 ● Self-Ligation Method ● Adaptor-Adding Method 2. 使用TdT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) 的 5’ RACE 法;Adaptor-Adding Method 原理;TdT 法原理;几种 5’ RACE 法的比较;本实验成功获取了PSPtet RNA的5’ 末端。 在mRNA 3’ 末端部分序列已知的情况下，可使用 TaKaRa 5’ RACE法有效获取其 5’ 末端序列。 3. 实验中注意以下环节，可提高实验成功率。 1）起始RNA的量与质量。 2）引物设计（●RT引物 ●特异性）。 3）5’ 末端未知序列的长度（尽量短）。;谢谢
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