SRY基因在部分动物类群系统进化中保守性研究.pdfVIP

维普资讯 山西大学学报 (自然科学版)25(3)：241～243，2002 JournalofShanxiUniversity(Nat．Sci．Ed．) 文章编号 ：0253-2395(2OO2)03—0241-03 SRY基因在部分动物类群系统进化中保守性研究 贺艳萍 ，郭亚平 ，马恩波 (山西大学生命科学与技术学院，山西 太原 030006) 摘 要 ：用特异于人 HMG—box区域 的一对引物 ，对脊推动物 5个纲 10个物种及 2种无脊推动物的基 因组DNA进 行 PCR扩增 ，并以dig标记 的人 SRY基 因为探针 ，与扩增产物进行 Southern杂交，结果表 明：在这 12个物种 中都 存在 SRY基 因的同源序列，无脊推动物克 氏螯虾及背角无齿蚌杂交 中显色较慢 ，表 明SRY基 因在 系统进化 中具 有高度 的保守性且 同源程度与物种在进化上 的地位有关 。 关键词 ：SRY 基 因；系统进化 ；PCR；Southern杂交 中图分类号 ：Q343 文献标识码 ：A 在人类中，性别决定受 SRY (SexdeterminingregionY gene，SRY)基因的控制 ，SRY基因存在 ，个体发育为男性 。SRY基 因现在 已被公认为是睾丸决定因子 的最佳候选基 因l1]。到 目前为止 ，仅在哺乳动物 中发现了SRY基因，并且不 同物种 问存在 较大 的差异 。而在鸟类 、哺乳类 、爬行类 、两栖类 以及 昆虫 中也报道 了 4O个 以上的 Sox(SRY—relatedHMG—boxgene)基 因，其 编码 的蛋 白质在 HMG—box内与 SRY 的相似性大于 6O 。 目前对个别物种 的Sox基因研究报道较多，但从系统进化角度进行研究的还很少 。1991年 ，Terrence等人 以人 SRY基 因 的 360bp片段为探针 ，采用 RFIP技术对无颌类 、硬骨鱼类 、爬行纲 、鸟纲 、哺乳纲等 5类脊椎动物的 23个物种做 了研究 。在 55c杂交条件下，23个物种都检测到了SRY基因的同源片段 ，各个物种问的条带存在多态性 ，但 同一物种的雌雄个体问无差 异 ]。这是 SRY基因在进化 中的保守性和变异性的有力证 明。本文从系统进化角度 ，用 PCR和 Southern杂交的方法 ，对脊椎 动物 5个纲 10个物种及两种无脊椎动物的 SRY基因的保守性进行 了探讨 ，为分析不 同性别决定机制之问的内在联系并进而 探讨 SRY基因的起源与进化提供理论参考 。 1 材料和方法 1．1 材料 供试物种见表 1，均为性成熟个体 。 1．2 实验方法 在基 因组 DNA制备 中，人 以血液为材料 ，鸵鸟和克 氏螫虾 以肌 肉组织为材料 。蚌角无齿蚌 以闭壳膜为材料 ，其余均 以心 脏组织为材料 。采用经典酚 ／氯仿抽提法获得 。 PCR 引 物参照 聂刘 旺等人 ，由上海生工 (SANGON)生物工 程有 限公 司合成 。PAGE纯化 。引物 序列 为 ：pl，5一 GAGGAATTCGGTCAAGCGACCcATGAACGC一3，p2，51_GAGGGATCCAGGTCGGTACTTATAATCGGG一3。该 引 物 的 5端各加 了 9个碱基 ．其中 6个为限制性 内切酶位点 。扩增条件为 ：基因组 DNA 0．5 g，每条引物 0．6／lmol／l，Mg 浓度为 2．0mmol／l，Taq酶 1u，反应体系为 25 1。循环条件为 ：94C1min，45C1．5min，73C1min，5个循环 。接着 94C40s。48C 30s。72Clmin。35个循环 。再 72C延伸 8min，4c保存 。 Southern杂交探针采用 SRY基 因中 360bp片段 ，其中包括 240bp保守 区序列 。PCR方法进行 dig标记 。扩增该片段 的引 收稿 日期 ：2001—12—10 作者简介 ：贺艳萍 (1976 )。女，山西汾阳人 。毕业于山西大学生命科学系，现为 山西大学生命科学与技术学院博士研究 生 ．