抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白单克隆抗体的制备及体外鉴定.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（２）：６３６８ 抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白单克隆抗体 的制备及体外鉴定 １，２ １，２ ２ １，２ ２ ２ ２ 张　梅 　王小波 　付远辉 　方　璇 　王　鑫 　张　莹 　 何金生 （１安徽医科大学免疫学教研室　合肥　２３００３２　２北京交通大学生命科学与生物工程研究院　北京　１０００４４） 摘要　目的：获得能稳定分泌抗人呼吸道合胞病毒（ｈｕｍａｎｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）融合糖 蛋白（ｆｕｓｉｏｎｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｆ）单克隆抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ，ｍＡｂ）的杂交瘤细胞株，以期用于 ＲＳＶ感染的早期诊断和被动免疫治疗研究。方法：通过杂交瘤技术制备可特异性识别ＲＳＶＦ的 单抗，体外鉴定生物学特性。结果：获得了可分泌抗ＲＳＶＦ蛋白的杂交瘤细胞株Ｆ８，体外连续传 ８ 代培养２个月，能稳定分泌抗体Ｆ８，培养上清效价为１∶１０００，亲和常数（Ｋａ）为６．８×１０Ｌ／ｍｏｌ。 Ｆ８属ＩｇＧ１型抗体，可特异性识别ＲＳＶＦ１亚单位的ＡＡ２０５２２２。免疫酶法蚀斑减少中和实验证 实Ｆ８具有体外中和活性及融合抑制活性。结论：获得具有中和活性的抗ＲＳＶＦ蛋白的单克隆抗 体，为ＲＳＶ感染的早期诊断及被动免疫治疗等奠定了基础。 关键词　人呼吸道合胞病毒　融合糖蛋白　单克隆抗体　杂交瘤技术 中图分类号　Ｑ８１９ 　　人呼吸道合胞病毒（Ｈｕｍａｎｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｙｔｉａｌ 前，美国儿科学会向有高风险健康状况的新生儿及儿 ｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）广泛分布于世界各地，是引起婴幼儿下呼 童推荐使用帕丽珠，预防下呼吸道感染。与ＲＳＶＩＧ相 吸道感染最重要的病毒性病原，老人和免疫缺陷病人 比，帕丽珠的制备及注射费用低，注射途径简单（肌 也易遭受ＲＳＶ引起的严重感染，ＲＳＶ也是我国婴幼儿 注），接种后不良反应少，无需推迟麻疹流行性腮腺 急性下呼吸道感染的主要病毒病原，引起婴幼儿流行 （ｍｅａｓｌｅｓｍｕｍｐｓｒｕｂｅｌｌａ，ＭＭＲ）和水痘（ｖａｒｉｃｅｌａ）疫苗的 性喘憋性肺炎或毛细支气管炎，分布广泛，流行发病率 接种，可用于冠心病患儿及先天性心脏病患儿，能够避 ［１２］ 为０．２４％～２１．９％，住院病死率为０．５％～４％ 。 免血源性传播疾病的危险等。 　　迄今为止，虽然尚无安全有效的疫苗被批准使用， 　　虽然帕丽珠可一定程度预防和治疗 ＲＳＶ感染，但 但具有中和活性的抗体用于预防ＲＳＶ感染却得到了证 对某些病人保护力差，并且帕丽珠只能预防下呼吸道 实。美国ＦＤＡ在１９９６年春季批准应用具有ＲＳＶ中和 ＲＳＶ感染而不能有效预防上呼吸道ＲＳＶ感染。因此美 活性的免疫球蛋白（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，ＩＧ）预防及治疗 国ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ公司和美国礼来ＡＭＥ公司（合作对帕丽 ＲＳＶ感染的特殊人群。１９９８年又批准 ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ公 珠进行优化并制备新一代抗 ＲＳＶ人源化单克隆抗体 司的人源化单克隆抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ，ｍＡｂ） Ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ（ＭＥＤＩ５２４，Ｎｕｍａｘ），其亲和力和效力均高 Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ（ＩｇＧ１，帕丽珠）用于临床，该抗体为ＲＳＶ融 于帕丽珠，而且在减少ＲＳＶ复制、控制炎性反应及肺 合蛋白（ｆｕｓｉｏｎｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，Ｆ）特异性单克隆抗体，能通 组织病变等方面的作用也强于帕丽珠，并且还能有效 ［３］ 过抑制病毒的复制并直接中和病毒而发挥作用。目 抑制上呼吸道中Ｒ