不同状态样品处理指南 - 基莱生物.pdfVIP

GENELIFE-基莱生物科技 不同状态样品处理指南 一、细胞样本采集操作建议流程 贴壁细胞的保存 1、贴壁细胞：贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养基，按照每10cm2生长表面积 加入1 ml Trizol试剂，在旋涡震荡器上混匀直至看不见成团的细胞块，使之充 分溶解于TRIzol中形成清亮不粘稠的液体。 2、放入干冰或-80℃冰箱中保存。 悬浮细胞的保存 1、悬浮细胞培养诱导结束后，将细胞悬液以1200r/min离心5min，去除上清培养 液。 2、按照每5×106细胞加入1 ml TRIzol试剂，在旋涡震荡器上混匀直至看不见成 团的细胞块，使之充分溶解于TRIzol中形成清亮不粘稠的液体。 3、放入干冰或-80℃冰箱中保存。 注意事项：我们不接收未经TRIzol 试剂处理的细胞样本。 二、组织样本采集操作建议流程 动物组织 1、首先准备好用于包装样本的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或 冻存管外表多处写明样本编号。 2、准确切除所需组织后，立即剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类 型。 3、在RNase-free 的生理盐水中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物。 4、用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，迅速投入液氮冷却。 5、填写样本信息登记单，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处 理过程等情况 临床标本 1、准确切除所需组织后，立即投入液氮冷冻。 2、用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织。 3、填写样本信息登记单，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处 理过程等情况。 植物组织 1、准确取得所需组织后，立即用准备好的铝箔包裹组织。 2、立即投入液氮冷冻。 3、填写样本信息登记单，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处 GENELIFE-基莱生物科技 理过程等情况。 三、血液样本采集操作建议流程 鉴于血液样本的不稳定性，我们建议客户在当地用新鲜样本提取RNA。可以用于 血液样本RNA提取的方案有TRIzol 以及QIAEN RNA BloodMini kit 等，以上这些 方法都可以提取到高质量的总RNA。 白细胞的分离 对于大量的全血样本，需要首先分离白细胞，而后进行总RNA 提取。 1、在已加入抗凝剂的新鲜全血中加入等体积PBS（1×），充分混匀； 2、缓慢转入另一已加入淋巴细胞分离液的离心管中，并使上述混合液处于淋巴 细胞分离液液面之上（即两种液体不要混合，保留清晰的界面），3000 g 离心 30 min； 3、用移液枪小心分离出白细胞层；用PBS（1×）清洗白细胞，离心回收白细胞， 弃去上清； 4、加入白细胞20 倍体积的RNA Happy 或TRIzol 试剂，用一次性注射器进行反 复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解并形成清亮不粘稠的液体； 5、放入干冰或-80℃冰箱中可以保存半周左右。 注意事项 1、血液样本保存是不稳定的，新鲜血液必须立即分离出白细胞或者直接提取RNA 进行保存； 2、白细胞样本保存也是不稳定的，未加TRIzol 试剂保存的白细胞是非常不稳定 的，白细胞样本务必按照上述过程进行保存； 3、请在-80℃冰箱中保存RNA 或者白细胞样本； 4、血液样品经冻融即发生溶血，不能用于RNA的抽提。 单个核细胞的分离 对于大量的全血样本，如实验需要，可以首先分离单个核细胞，而后进行总RNA 提 取。 1、在离心管中加入3-4ml Ficoll，再缓慢沿管壁滴加全血5ml 左右（切忌破坏 界面）。 2、室温水平离心，2000rpm，15 分钟。 3、用Tip 头小心吸取中间一层薄的呈云雾状的单个核细胞。 4、用PBS 或HANKS 液或生理盐水或1640 培养液洗涤单个核细胞溶液。 5、室温1000rpm 离心洗涤10min。 6、弃上清，再重复步骤5 一次，合并各管。 7、TRIzol 试剂溶裂解细胞，保存于—80℃冰箱中待抽提RNA。