セルブロック法の有用性の检讨 ～各种方法の比较 - アジア器材.pdfVIP

セルブロック法の有用性の検討 ～各種方法の比較～ 神戸大学医学部附属病院 病理部 山田寛、塚本龍子、達摩知子、森藤哲史、 柳田絵美衣、今川奈央子、伊藤智雄 はじめに セルブロックとは細胞診検体を何らかの方法で固化し、 それを固定、包埋、薄切の工程を経て組織学的に観察する手法のことである。 近年、細胞診分野において細胞形態診断に加えて、免疫染色、In situ hybridization、 FISHなど、様々な検索が必要に応じて求められてきている。 しかし細胞診では同一細胞で複数の染色を行うには限界がある。 そこで細胞診と組織診の中間的な方法であるセルブロックが注目される。 セルブロックの利点としては １）パラフィンブロックなので取り扱いが容易 ２）連続切片などで同一細胞の複数枚標本作製が可能 ３）半永久的保存が可能 ４）DNA抽出などにも使用可能 などがあげられる。 はじめに しかし、このような利点がある半面、 １）試薬の調整が面倒 ２）手技が煩雑 ３）細胞が少数の場合は、回収率が悪い などの理由から倦厭されて来たことも事実である。 今回我々は、文献などで一般的に紹介されている方法を実際に行って、 その結果より、各種方法の欠点を考察。 それを基に、欠点と思われる部分に改良を加え、従来法と比較検討。 手順が簡単で、細胞保持の良い方法を数種紹介する。 方法 まずは文献などを参考に以下の方法を行った １）コロジオンバッグ法 （和光純薬 5％コロジオン液） ２）寒天法 （和光純薬 5％溶液） ３）アガロース法 （BM Bio 1％溶液） ４）アルギン酸ナトリウム法 （和光純薬 1％溶液） ５）OTCコンパウンド法 （Tissue-Tek） ６）グルコマンナン法 （アジア器材 HOLD GEL 110キット） 検討項目 （１）各セルブロック作製法における細胞損失率（％）の測定 （２）細胞損失の原因の考察 （３）原因に対する改良方法の検討 （４）従来法との比較 方法 各種方法手順フローチャート 細胞診検体 遠心して沈査を分離 固定（10％ホルマリン） 遠心、上清を除去 アルギン酸 OTC コロジオン法 寒天法 アガロース法 ナトリウム法 コンパウンド法 グルコマンナン法 バッグごと アガロースを アルギン酸 エタノールで アルコール 寒天を添加 取り出す 添加 Naを添加 脱水 で脱水 沈査にグル 沈査にOTC 固化 固化 遠心、沈査 コマンナン添 混和