阿达玛变换显微图象分析系统测定乳腺肿瘤细胞dna 含量.pdfVIP

化学学报 ACTACHIMll‘ A SINICA 1997 , 55 , 1019-1024 阿达玛变换显微图象分析系统测定 乳腺肿瘤细胞 DNA 含量 唐宏武a * * 陈观全全b 梅二文b 曾云鸦a (ι 武汉大学化学系 分析测试科学系 武汉 430072) 毛永荣 何平 史宗洁 (湖北省肿瘤医院武汉 430070) 摘要 水文以n( 院橙为细胞 D:-.J A 荧光探针，探讨了影响阿达玛变换M. 微阁象分析仪定 r I~: 分析细胞 DNA 时的细胞荧光强度以提影响人乳腺肿瘤细胞 DNA 定怪:分析结果准确性的儿个因素，结果表 明: (1)乙醇是理想的固定剂，自主类固定开IJ 对细胞 AO~DNA 复合物的荧光有U 著影响;(2) 叮咬橙染 色液中含 Triton X-- 100 U.j细胞荧光强度明、协增大 ;(3) 盯院橙的最佳荧光染色浓度为50/1g/mL; (4) 在分析乳腺Il中惚细胞 D~A 含 f1t (倍性)时，采用外标法(以人血涂片或淋巴结细胞涂上的淋巳细胞 为标准 A 俏体细胞)式1)，1 际法(以乳腺肿瘤细胞涂片上的正常上皮细胞为标准才育体细胞)均能得到 较好结果，f日后后更为ilf~在 ;(5) 随机分析六十个以上肿瘤细胞，可得到较好分析结果. 关键词 阿达玛变换，图象分析，乳牒肿瘤，细胞 DNA 定量分析 正常人各种组织内 DNA 含量是较恒定的工倍体.恶性肿瘤的 DN八含量均高于相同的 正常细胞，或出现不规则的 DNA 含量分布，DNA 的变化直接反映肿瘤的增确能力 .DN八含量 不断增高，异伯体的出现是恶性肿瘤的 A 种重要生物学标志[IJ 因此，肿瘤细胞的 DN八含量 分析只有 1分重要的意义.在临床医学和细胞生物学中，鸡红细胞、人淋巴细胞、蹲{(t 红细胞和l 倒: {{t 红细胞是常用的 DNA 定量标准[21 ，国内也有使用鳖红细胞的报道131 ， 11( P}Ë柑(八())是­ 种常川的细胞内 DN八和I R.NA 的荧光探~t 试剂[4] ，它与核酸的结合方式有两种:是|挝人核 酸的权链的碱毕对之|可，形成 AO-DNA 复合物，二是与单链核般的磷酸发t 静r l!. lìjJ 村i 11: 作 用，形成八()- RNA 复合物，如l 用蓝光激发，前者发射峰值为 530nm 的绿色荧光，盯rr 发射峰 值为 640nm (J/~ 红色荧克. 阿达玛变换(HT) 屉微图象分析是近几年发展起来的→种分析方法，它把 HT 多通j且才可 jilJ !现象技术与 M微技术结合起来，以获取微小i式样的图象，并从图象中获取试样的定由分析数 据.在前面的110且中，我们介绍了自制的 HT 显微图象分析仪的结构、 r 作原理和l{-f关性 能[5 剖，此外，我们压以正常人外周静脉血淋巴细胞为标准二倍体细胞，以 AO 为~III 胞 DN八荧 光探引，用 HT 显微罔象分析仪测定了乳腺肿瘤细胞的 DNA 含量(倍性) ，分析结果与临床细 胞学诊断结论相吻合[4] ，1fl t亥技术在测定细胞荧光的过程中常受到一些非随机闪素的影响. 为进·步提高分析结果的准确性，本文将探讨细胞固定剂和荧光探针浓度等冈素对细胞八o -DNA 复合物荧光的影响，并讨论以不同细胞为标准细胞和分析的肿瘤细胞数量对乳腺肿瘤 19lJ6时 20 收到修吹得:j IYl)6侃一 25 收到本文为凶家自然科学基金有l 湖北行自然科节J， t ;í;: ?,i1的l 啦!坦 政lAìMt 泉州华侨大学化学系 l 作 1020 化学学报 ACTA CHIMICA SINICA 1997 细胞 DNA 定量分析结果准确性的影响. 1 实验 1. 1 仪器 实验所用仪器为自制的 HT 显微图象分析仪.该仪器由 44 XII 落射式荧光显微镜(上海光 学仪器厂)，WIX; 30 光栅单