实验六酵母菌细胞计数、 死亡率和出芽率的测定.pdfVIP

实验六 酵母菌细胞计数、 死亡率和出芽率的测定 • 一、 实验目的 • 1. 了解血球计数板的构造和使用方法 • 2. 掌握用血球计数板对酵母细胞进行计数 • 3. 掌握酵母菌水浸片的制备方法 • 4. 掌握用酵母出芽率和死亡率的测定原理和方法 • 二 实验原理 • 1. 酵母菌细胞计数 • 原理：对酵母菌来说，分总菌计数和活菌计数两大类， 分别称为直接计数法和间接计数法。本实验是利用血 球计数板对酵母细胞直接计数，在计数的同时，还可 统计其出芽率。 • 血球计数板结构和类型 • 血球计数板计数室的长和宽各为1mm，中间平台下陷 0.1mm，故盖上盖玻片后计数室的容积为0.1mm3 。 不同规格血球计数板的计数室 血球计数板构造示意图 A 麦氏血球计数板 B 希里格氏血球计数板 • 计算 • ①16×25型：酵母菌细胞数/毫升= ×400 ×10×1000× 稀释倍数 • ②25 ×16型：酵母菌细胞数/毫升= ×400 ×10×1000× 稀释倍数 • 2. 酵母细胞出芽率的测定 • 原理：酵母菌生长繁殖时会出芽，如遇到芽体大小超 过细胞本身50%时，不作芽体计数而作酵母细胞计数。 • 方法：用液体培养的酵母菌液制作水浸片，直接在洁 净载片上滴加菌液一滴，取洁净盖片一块，先将盖片 一端与液滴接触，然后将整个盖片慢慢放下避免气泡 产生。高倍镜下观察酵母菌出芽率并计数并计算。取 三次测定结果的平均值。 • 计算公式： 酵母菌出芽率=芽体数/细胞总数×100% • 3. 酵母细胞死亡率的测定 • 原理：活的微生物，由于不停地新陈代谢，使细胞内氧化还原 值（rH ）低，且还原能力强。当某种无毒的染料进入活细胞后， 可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力 或还原能力差而被着色。在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生 质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来 区别活菌与死菌。实验室常用美蓝等低毒性的、易与细胞结合的 染料进行活体染色。染色必须在高于细胞等电点的pH值下进行， 否则细胞吸收碱性染料量很少，易造成观察误差。 • 方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许 加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观 察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。 • 计算公式： 三、实验材料 1. 菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） ，热带假丝酵母（Candida tropicalis），八孢裂殖 酵母 （Schizosaccharomyces octosporus ） 3.工具：血球计数板、显微镜等。 • 四、实验内容 • 1．个体形态观察 • 2 ．群体形态观察 • 3. 观察假丝酵母小室培养的结果并绘图 • 4. 用血球计数板对酿酒酵母进行计数 • 5 ．用酿酒酵母水浸片测定酿酒酵母的出芽率 • 6.用美蓝染色测定酿酒酵母的死亡率 • 思考题： • 利用血球计数板测定的是总细胞数还是活细胞数，测 定微生物活细胞数可采用哪种方法？