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TLC的基出知识及实务 合成室:杨书彬 提纲 一． TLC概述 二． TLC展开 三． TLC常用显色方法 四． TLC 在日常工作中的广泛应用 五． TLC常见问题集锦 一、TLC概述 薄层层析分类: ??吸附薄层层析(硅胶) ??分配薄层层析(纤维素) ??薄层离子交换层析(离子交换剂) ??薄层凝胶层析(分子筛凝胶) 吸附薄层层析原理: ??利用吸附剂(硅胶)对样品中各组分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各组分达到分离的目的。 特点：微量、快速、简单、节省 二、TLC展开 1.吸附剂 硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性 原理：硅醇基（吸附中心）与极性基团产生吸附性 硅胶 活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。 活化：加热至110℃左右，除去吸附水提高活度 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关 氧化铝 碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合 物，如生物碱、脂溶性维生素等； 中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离 活度也与含水量有关。 二、TLC展开 层析板的制备 二、TLC展开 B.不含粘合剂的层析板:一般称为软板。分干法制板与湿法制板两种: 干法制法取玻棒或细玻璃管，两端用金属片或胶布、橡皮圈包上(厚度0.3—1毫米)，中间距离根据需要确定。取玻璃板(单向层析一般为5×20cm)上面撒上吸附剂，用玻璃棒向前推动，务使吸附剂铺展均匀，并形成一薄层，铺好后即可使用。如欲双向层析，需取20×20cm玻璃板铺制。如这种方法制得的薄层板，质地疏松，很不坚固。稍受振动或风吹就会把薄层损坏，因此在以后各操作过程中，都要注意加倍小心。这种铺制常用的吸附剂有氧化铝和硅胶。 二、TLC展开 湿法制板 有的吸附剂用干法制板，很难铺匀。这时可采用湿法铺板。 氧化铝糊板:取层析用氧化铝，加适量水调成糊状，铺制。 聚酰胺板:聚酰胺粉干法制板较困难。一般要加适当有机溶剂或石膏、纤维素等。例如取聚酰胺粉5g，加氯仿2份、甲醇3份的混合溶剂45ml，混匀调成糊状铺制。 微晶纤维素板:取纤维素1分加5-6倍的水研磨或加入丙酮，调成糊状，铺制。 上述各种方法制得的薄层板，若用于分配层析时，则铺层后，置于室温下放置充分干燥，即可使用。 若作吸附层析时，自然干燥后则需要活化。活化的条件视吸附剂和要求不同而异，如氧化铝G薄层置200—220℃烘4小时，可得活性Ⅱ级的薄层；150～160℃烘4小时，可得Ⅲ—Ⅳ级活性薄层。硅胶G有在110℃烘1小时、80℃烘半小时或临用前105℃活化半小时等，根据需要而定。 活化后的薄层必须置干燥器中保存备用。如果展开剂中含有水时，作分配层析板不必活化，常温下干燥即可应用。 二、TLC展开 2.展开剂 常用展开剂极性大小顺序 石油醚二氯甲烷乙醚四氢呋喃乙酸乙酯丙酮正 丙醇甲醇水 常用的展开体系 EA/PE，DCM / MeOH PE / Acetone，Ether / DCM，EA / DCM Acetone / DCM 二、TLC展开 展开剂的选择原则 ① 对所需成分有良好的溶解性； ② 可使各成分间有较好的分离； ③ 待测组分的Rf在0.2～0.8之间； ④ 不与待测组分发生化学反应； ⑤ 沸点适中，黏度较小； ⑥ 展开后组分斑点圆且集中； ⑦ 混合溶剂最好新鲜配制。 二、TLC展开 3.被分离的成分 在指定的吸附剂和展开剂的条件下，各成分的分离情况直接与被分离成分的结构和性质有关。如对氧化铝和硅胶一类吸附剂，被分离的成分极性大，被吸附的作用也强。 看一个化合物的极性大小，不但要看特殊的功能基团，还要看化合物的整个分子极性大小。整个分子中极性基团越多，被吸附的性能就会越大，分子中双键多，吸附力强，共轭双键多，吸附力增大；在同系物中碳原子少的比碳原子多的吸附力强；在同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键位置时，其吸附力弱于羟基不能形成氢键的化合物。 总之，全面考虑吸附剂、展开剂和成分三者间的相互关系，是分离效果成败的关键。 二、TLC展开 4.点板注意事项 ??TLC板防潮 ??原点不能被浸泡 ??点样小且圆 ??交叉点 ??展开Rf有效范围 三、TLC显色方法 一看、二照、三碘、四显。 ① 首先在日光下观察，划出有色物质的斑点位置 ② 在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点 ③ 大部分有机物会吸附碘，可逆的产生棕色或黄色斑点 ④ 既无色又无紫外吸收的物质，可以用显色剂显色 三、TLC显色方法 四、TLC 应用 A. TLC 监测跟踪反应 反应有无新点产生 原料有无剩余 反应是否干净 综合判定反应应该如何处理 四、TLC 应用 B. TLC 综合判定后处理的情况 淬灭反应前后 萃取