紫外线照射所致的DNA损伤对连接转化的影响.PDFVIP

2010;30(1)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%南方医科大学学报(J%South%Med%Univ) · 111 · 紫外线照射所致的DNA 损伤对连接转化的影响 1 2 3 1 2 4 1 5 1 2 黄婉玲 ，李长征 ，陈振瑞 ，贺 微 ，周 烨 ，周志刚 ，刘叔文 ，周 辰 南方医科大学药学院， 南方医科大学 ( 基因工程研究所 3 4 ， 南方医科大学南方医院，广东广州510515 ； 广州医学院第二附属医院，广东广州510260 ； 5 香港Dgen 生物技术有限公司，香港999077) 摘要： 目的探讨DNA 经不同波长紫外线照射与经紫外线照射不同时间所致损伤对基因库构建中DNA 连接转化效率 的影响。 方法经改造的质粒DNA 使用Sfi I 酶切过夜，1%琼脂糖凝胶电泳分离，在不同波长不同时间紫外线照射的条 件下回收目的片断，并进行目的片断的连接转化，计数菌落数，计算转化效率。 结果经 302%nm 波长紫外线照射后，其连 接转化的菌落数极少 （60 个/ng%DNA ），365%nm 波长紫外线照射条件下回收的DNA 仍可被有效连接转化。 在 365%nm 波长紫外线照射下，与未经照射进行比较，当照射时间在30%min ，其连接转化成功率低于 50% ，而照射 5%min 、15%min 的 连接转化成功率仍高于70% ， 可满足大部分分子生物学实验的需要。 回收的DNA 连接转化的最大效率可超过20000 个菌落/1%ng%DNA 。 结论在构建大容量基因库回收目的片断时，应避免紫外线的照射；在需要时，应选择在 365%nm 波长 紫外线照射条件下进行，且照射时间应尽量缩短，以不超过 15%min 为宜。 关键词：紫外线；连接转化；基因库 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） R392%%%%%%%% A%%%%%%%% 1673-4254 2010 01-0111-03%% %%%%%% %%%%%% Effects of UV-induced DNA damage on vector ligation and transformation into bacterial cells 1 2 3 1 2 4 1 5 HUANG%Wan-ling ,%LI%Chang-zheng ,%CHEN%Zhen-rui ,%HE%Wei ,%ZHOU%Ye ,%ZHOU%Zhi-gang ,%LIU%Shu-wen ,%ZHOU%Chen 1 2