SSR扩增产物检测方法比较及其实验操作注意事项.pdfVIP

第 32卷 第 9期 2013年 9月 种 子 (Seed) · 种子检验 · SSR扩增产物检测方法比较及其实验操作注意事项 戴 剑， 张云辉 (江苏省农业科学院粮食作物研究所， 南京 210014) ComparisonofDetectionMethodsforSSRAmplifiedFragmentsandAttentionsofr ItsOperationinExperiments DAIJian，ZHANG Yun-hui 摘要 ：介绍了琼脂糖凝胶 电泳、聚丙烯酰胺凝胶 电泳和荧光标 1 琼脂糖凝胶电泳 记毛细管电泳等几种 PCR扩增产物检测的方法，比较了各 自 琼脂糖凝胶电泳的原理是使用琼脂糖凝胶作为固 的优缺点，指出了应用这些方法实验操作过程中的注意事项， 建议采纳试验结果精确度高、操作简便、高效的荧光标记毛细 体介质，借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，混悬于溶液中 管电泳方法。 的样品电荷颗粒在电场影响下向着与 自身相反电荷的 关键词： 琼脂糖凝胶 电泳；聚丙烯酰胺凝胶 电泳； 电极移动，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同， 荧光标记毛细管电泳；注意事项 电泳移动速度有差异而得到分离。琼脂糖的电泳步骤 中图分类号： Q503 文献标志码 ： A 相对简便，易操作，但也需注意以下几点操作要点，才 文章编号： 1001—4705(2013)09-0120--04 能最终获得清晰的电泳结果。 随着现代分子生物学的快速发展，分子标记技术 (1)琼脂糖的纯度会直接影响DNA的分辨能力 已广泛应用于遗传育种、物种亲缘关系鉴别、基因组作 及 电泳结果的清晰度。如琼脂糖 中混有其他糖、盐及 图、基因定位、基因库构建、基因克隆等许多研究领域。 蛋 白质等，会影响DNA在凝胶中的迁移速度及回收的 DNA分子标记技术已有数十种，建立在PCR基础上的 DNA片段进行酶促反应时的反应性能。因此，使用高 SSR分子标记，鉴于其数量丰富，等位变异多，分布广 质量的琼脂糖对实验的成功至关重要 。 泛，共显性和操作简便可靠，发展非常迅速。在 SSR (2)根据需要检测DNA片段大小的大致范围，配 ， ～ ㈣ 分子实验中，DNA提取、PCR扩增和产物分离是3个 制合适的琼脂糖浓度凝胶 ，可参考表 1所列数据。制 关键环节，其 中，PCR扩增产物的检测技术是试验成 备凝胶时需用电泳缓冲液溶解琼脂糖，而不是超纯水。 功的制约条件 ，也是技术难度最大、最复杂的环节 。而 常用的琼脂糖凝胶 电泳缓冲液有 TAE和TBE。 在植物品种鉴定、DNA指纹数据库构建、遗传图谱构 表 l 琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA的最佳分辨范围 建等研究领域 ，通常需要做大量的实验 ，以获得大量的 琼脂糖浓度 (％) 最佳线形 DNA分辨范围(bp) DNA指纹图谱数据，因此，高效精准的实验方法显得 0．5 尤为重要。常用的PCR扩增产物的检测方法有琼脂 0．7 1．O 糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、荧光标记毛细管电