H2 O2对Caco-2细胞氧化应激的影响.pdfVIP

圜 澎江雇J-：种学 2013年第9期 文献著录格式：杜威 ，李雅丽，吴红照，等．H：O2对Caco-2细胞氧化应激的影响 [J]．浙江农业科学，2013 (9)：1202—1205 H2O2对 Caco一2细胞氧化应激的影响 杜 威，李雅丽，吴红照，崔志文，余东游，李卫芬 (浙江大学动物科学学院饲料科学研究所农业部动物营养与饲料重点开放实验室，浙江 杭州 310029) 摘 要：研究 H：O 对 Caco一2细胞抗氧化应激能力 的影响。试验按培养时间不 同分为 3组 (12，24和 48h)，每组的HO 浓度分为4个水平 (0，50，100和 200txmol·L。。)，细胞培养至 12，24和 48h时测定细 胞活性，培养上清液和细胞裂解液中的抗氧化指标。结果表明，50~xmol·L～H0：对 Caco．2细胞并没有产生明 显的氧化损伤，100Ixmol·L～H2O2对 Caco-2细胞产生了可恢复的氧化损伤，200Ixmol·L H2O 则对 Caco-2 细胞产生了严重的、不可逆的氧化损伤；24h时细胞的各项清除自由基能力较高，48h时细胞的氧化损伤加重， 细胞产生抗氧化物质的速度减慢 。表 明 100I．Lmol·L HO：对细胞产生了比较合适 的氧化应激 。 关键词 ：H2O2；Caco一2细胞 ；氧化应激 中图分类号：S852．2 文献标志码 ：A 文章编号：0528—9017(2013)09—1202-04 动物体内每时每刻都在进行着氧化反应。在正常 有限公司。台盼蓝 、TritonX．100：上海泽衡生物 状态下，动物体内的抗氧化系统会消除过量活性氧， 技术有限公司。其他均为国产分析纯。 维持内环境的稳定。但是当动物饲粮配比不合理 1．2 方法 或受到不良的外界环境 等因素影响时，体内氧化与 1．2．1 Caco．2细胞培养 抗氧化的系统失衡 ，动物机体就会处于氧化应激状 Caco-2细胞于 37c=【，5％ CO，细胞培养箱 中 态。氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体 内 培养，DMEM 高糖培养液 中含 10％胎牛血清 、 的高活性分子如活性氧族 (ROS)和活性氮族 100U ·mL 青霉素、100Ixg·mL 链霉素。 (RNS)产生过多，氧化程度超出氧化物的清除率， 1．2．2 试验分 组 氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致细胞和组织损 将 Caco-2细胞接种于六孔板 ，每孔保持 2mL 伤 。研究表明，氧化应激会导致哺乳动物细胞大分 培养液 。培养至细胞贴壁后开始试验。试验按培养 子损伤和器官功能障碍 ，降低生产性能，感染各种疾 时间不同分为3组 (12，24和48h)，每组按添加 病 。因此，在动物应激医学研究中，氧化应激已 H：0 浓 度不 同分 为 4个水 平 (0，50 100和 经成为当下研究的热点 。本试验旨在研究不同作 200I．Lmol·L )，每个水平 3个重复。 用时间及添加浓度的H：0 对 Caco．2细胞氧化应激程 1．2．3 样品收集 度的影响，寻求能产生适当的氧化应激的条件，为体 12，24和 48h时分别取 出六孔板 ，吸取培养 外细胞氧化应激的深入研究提供基础。 上清液装入离心管 ，备用。每孔用 0．86％的生理 盐水迅速洗涤3次 ，然后每孔加200IxL胰酶消化 ， 1 材料与方法 用2mL生理盐水 (0．86％)悬浮细胞。取 200IxL 1．1 材料 细胞悬液留待计数活细胞 ，剩余的在5000r·min Caco-2细胞。购 自中国科学院上海生命科学 离心8m