3株纤维素分解真菌的分子鉴定.pdfVIP

江苏农业科学 2013年第41卷第 8期 一 5l一 王 璐，张海红，杨 柳，等．3株纤维素分解真菌的分子鉴定[J]．江苏农业科学，2013，41(8)：51—53 3株纤维素分解真菌的分子鉴定 王 璐 ，张海红，杨 柳，温洪宇，王文娜 (江苏师范大学生命科学学院，江苏徐州221116) 摘要：通过对 3株纤维素分解真菌XWSFJJ1、XWSFJJ2和XWSFJJ3的ITS+5．8SrDNA区的克隆与测序，获得长度 分别为569、599、590bp的有效基因片段 ，以及在NCBI的GenBank数据库中BLAST获得亲缘关系较近的模式菌株 ，最 后采用MEGA4．0软件构建分子发育树，研究3株菌的分类学地位。结果表明真菌XWSFJJ1和XWSFJJ2属于曲霉属 (却 e llus)，分别与萨 氏曲霉 (Aspergillussydowii)和塔宾 曲霉 (AspergiUustubingens~)的亲缘关系最近，命名为 AspergiUussydowiiXWSFJJ1和AspergillustubingensisXWSFJJ2；真菌 XWSFJJ3属于青霉属(Penicillium)，与PeniciUium oxalicum亲缘关系最近，命名为PenicilliumoxalicumXWSFJJ3。上述结果显示ITS+5．8SrDNA区序列可应用于真菌的 快速分类鉴定。 关键词：纤维素分解菌；ITS+5．8SrDNA区；分子鉴定 中图分类号：S182 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2013)08—0051—02 纤维素作为一类多糖类物质，广泛分布于自然环境中，其 馏水 1000mL。121℃灭菌20min。 中农业生产中的麦秸、玉米秸秆、高粱秸秆与稻草等都含有丰 1．3 菌株 ITS+5．8SrDNA区的扩增 富的纤维素。针对现在农村中焚烧秸秆污染环境的现状 ，如 挑取PDA培养基上生长的菌丝 ，采用总基因组提取试剂 何采用生物技术将纤维素资源化，无害化处理，值得人们认真 盒提取XWSFJJ1、XWSFJJ2和XWSFJJ3的总基因组。分别以 思考。自然环境中存在着大量能够分解纤维素的微生物物 3株菌的总基因组为模板，PCR扩增 ITS +5．8SrDNA区序 种，如细菌…、放线菌 与真菌 。利用微生物分解纤维素 列，引物 ITS1序列为：5 一TCCGTAGGTGAACCTGCGG一3， 具有费用低，无二次污染等优点，为纤维素的资源化提供了新 引物 ITs4序列为：5一TCCTCCGCTFATrGATATGC一3“。 途径 J。真菌是分解纤维素的主要微生物类群 ，前人对能够 PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃变性30S，55℃退火 分解纤维素的真菌进行了大量的筛选分离工作 ，也对分解纤 30s，72℃延伸 1rain，循环 35次；72℃延伸 10min，4℃ 维素的相关酶类的催化活性进行了深入系统的研究 。针 保存。 对分解纤维素真菌的物种鉴定工作依然繁重，如何采用快速 1．4 PCR扩增产物胶回收与克隆 准确的方法对所分离真菌进行鉴定 ，成为了研究人员面临的 通过DNA胶回收试剂盒 (上海生工生物工程有限公司) 难题 。 从琼脂糖凝胶电泳中回收目的DNA片段 ，与pMD18一T载体 随着国际基因数据库的逐渐完善，使得人们利用生物信 连接，转化大肠杆菌 DH5a感受态细胞，涂布平板培养过夜后 息学技术对未知真菌进行鉴定成为可能。真菌作为一类真核 挑取白色菌落于放有5mLLB的试管中，37℃摇床培养5h 生物，其基 因组 中编码核糖体的基 因包括 了28SrDNA、 后 PCR检测。 5SrDNA、18SrDNA 和 5．8SrDNA4种，其 中18SrDNA、 1．5 测序与序列