高效液相-柱后衍生法测定草甘膦及其代谢产物氨甲基膦酸.pdfVIP

高效液相-柱后衍生法测定草甘膦及其代谢产物氨甲基膦酸 草甘膦（glyphosate, GLY ）为内吸传导性强的广谱灭生性输导型茎叶处理剂， 具有广谱、高效、低毒、低残留的特点。其主要代谢物为氨甲基膦酸 (AMPA)， 它们均呈弱酸性，极性高，水溶性强，不易溶于有机溶剂。草甘膦作为一种常用 的水溶性除草剂，已成为目前世界上应用最广生产量最大的除草剂。 草甘膦一直以来被认为是 “安全”的除草剂，然而，近年来的研究表明，其 能够造成大量益虫死亡，对水生生物也具有极强的毒性。此外，草甘膦还能够使 土壤中的微生物种群比例发生改变，造成有益微生物活性降低，土壤有机质含量 下降，从而降低土壤的质量。近些年的研究也显示环境中的草甘膦（在转基因大 豆等制品中有残留）可能与先天性心脏病以及其他先天畸形有关。新颁布的《生 活饮用水卫生标准 (GB5749—2006)》中草甘膦的卫生标准为小于0.7 mg/L 。 其易溶于水，难溶于一般有机溶剂，缺少发色团和荧光团，因此，对其分析 测定难度很大，尤其在环境中有其他常见化合物存在情况下，进行痕量测定愈加 困难。本文采用了高效液相-柱后衍生法测定水中的草甘膦含量，柱后衍生之后 用荧光检测器进行检测。柱后衍生法先用次氯酸盐将草甘膦氧化成氨基乙酸，氨 基乙酸将与OPA 反应生成具有强荧光性的异吲哚产物进入荧光检测器检测。 该方法灵敏度和精确度高，干扰少且成本相对低，重现性好，能直接进样测 定，适合于大批量样品的检测。 材料与方法 主要仪器： 高效液相色谱系统（购自美国Agilent 公司）：包括脱气机、四元泵、自动进样器、 柱温箱、荧光检测器（FLD ）； PCR2 柱后衍生装置（双泵双反应器，购自天津兰博实验仪器设备有限公司）； 超声波清洗机（购自济宁科源超声设备有限公司）； 混匀器（购自上海沪粤科学仪器有限公司）； 主要试剂： 草甘膦和氨甲基膦酸标准物（浓度≥99.0%，国家标准物质研究中心）； 邻苯二甲醛 (OPA)、巯基乙胺固体为色谱级；次氯酸钠、硫代硫酸钠 Na S O ( 分 2 2 3 析纯 ) 。其余均为分析纯。空白水：超纯水。 流动相：0.4%磷酸-0.1%磷酸二氢钾水溶液 （pH=2 ） 衍生剂1：次氯酸钠溶液：5%次氯酸钠100 μL ，加入950 mL 的1%氯化钠，0.1% 磷酸二氢钾，0.1%氢氧化钠水溶液中；pH=12 ）； 衍生剂2 ：100 mg OPA 用10 mL 甲醇溶解，同时与2 mL 巯基乙醇加入到950 mL 的13%硼酸钾的水溶液 （pH=9.8 ）中，使用前通氮气去氧（10~15min）。 HPLC-柱后衍生测定条件： 色谱柱：分析柱：阳离子交换柱4 mm ×150 mm ×8 μm 保护柱：阳离子交换柱3 mm ×20 mm ×8 μm 柱温：55℃ 进样体积：10 μL 流动相流量：0.4 mL/min 衍生剂1 流速：0.3 mL/min 衍生剂3 流速：0.3 mL/min 反应器1 温度：36℃ 反应器2 温度：室温 荧光激发波长：330 nm 发射波长：465 nm 标准色谱图结果： Y L A G P M A 0 5 10 15 min Ret