酿酒酵母组蛋白h3k56a突变菌株的构建及其对细胞生长的影响.pdfVIP

江苏农业科学　２０１６年第４４卷第１２期 — ７７— 薛涛涛，边　金，伍　陆，等．酿酒酵母组蛋白Ｈ３Ｋ５６Ａ突变菌株的构建及其对细胞生长的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（１２）：７７－８１． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．１２．０２０ 酿酒酵母组蛋白Ｈ３Ｋ５６Ａ突变菌株的构建 及其对细胞生长的影响 薛涛涛，边　金，伍　陆，赵秀娟，崔向军，蔡　禄 （内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古包头０１４０１０） 　　摘要：组蛋白修饰，例如甲基化、乙酰化等修饰对基因表达和细胞生长至关重要。为揭示组蛋白Ｈ３第５６位赖氨 酸（Ｋ）修饰对酵母细胞生长的重要性，构建Ｈ３Ｋ５６定点突变为丙氨酸（Ａ）的组蛋白突变株Ｈ３Ｋ５６Ａ，并对其在高温、 高盐等条件下的生长状况进行初步检测。根据酵母同源重组的原理，采用两步替换法构建Ｈ３Ｋ５６Ａ突变菌株，用分光 光度法测定突变菌株的生长曲线，并分别在高盐、高温条件下检测突变体的表型。结果表明，酿酒酵母组蛋白 Ｈ３Ｋ５６Ａ突变菌株构建成功，其生长曲线与野生型无明显差异；Ｈ３Ｋ５６Ａ突变株对高温、高盐条件均较敏感，且在高盐 条件下，菌体生长缓慢、菌落偏小，表明组蛋白Ｈ３Ｋ５６位点的修饰可能与酿酒酵母抗高盐、高温机制有关。 　　关键词：酿酒酵母；Ｈ３Ｋ５６Ａ突变菌；组蛋白修饰；两步替换法；同源重组；高盐环境；高温环境；抗逆机制 　　中图分类号：Ｓ１８８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）１２－００７７－０５ 　　核小体是真核生物细胞内染色质的基本组成单位，它由 Ｈ３、Ｈ４的基因都有２个拷贝，主要的核心组蛋白基因组成４ ［１］ １４７ｂｐ的ＤＮＡ缠绕核心组蛋白八聚体形成 ，组蛋白Ｈ１与 个基因座，每个基因座包含２个组蛋白基因，这２个基因共用 ２个核小体之间有４０～６０ｂｐ的连接ＤＮＡ以稳定核小体的结 １个中心启动子并以不同的方向进行转录。编码组蛋白Ｈ３、 ［２］ 构 。组蛋白八聚体具有球状的三维结构，而蛋白质氨基端 Ｈ４的２个基因分别为ＨＨＴＩ－ＨＨＦ１、ＨＨＴ２－ＨＨＦ２，分别位于 则游离在三维球形的表面，游离氨基端的氨基酸残基可以被 ［４］ Ⅱ号、ＸＩＶ号染色体上 ，在基因组中这２个拷贝只要有 １个 ［３］ ［５］ 共价修饰 。在酿酒酵母中，编码核心组蛋白Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、 存在，便可维持细胞的正常生存 。组蛋白Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ的２ 个基因座分别为ＨＴＡ１－ＨＴＢＩ、ＨＴＡ２－ＨＴＢ２，它们编码几乎 收稿日期：２０１５－１１－０２ ［６］ 相同的组蛋白Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ 。与组蛋白Ｈ３／Ｈ４不同的是基因 基金项目：国家自然科学基金（编号３１２６０２７４）；内蒙古自 座ＨＴＡ１－ＨＴＢＩ对于细胞的生存是必需的，但ＨＴＡ２－ＨＴＢ２ 然科学基金（编号：２０１５ＭＳ０３３４）。 作者简介：薛涛涛（１９９０—），女，山西临县人，硕士研究生，主要从事