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安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 20 11 ，39 (22):13306 － 13308 责任编辑 宋平 责任校对 李岩 苜蓿叶绿体DNA 的提取及其Rbcl 基因片段的克隆 1，2 1，2 1，3 1，2 1，2 1，2 * 1* ， ， ， ， ， ， 朱海林 刘秀明 江莺 杜美丽 李巍 李海燕 李校堃 (1． ， 130 118 ;2 ． ， 130 118 ;3 ． 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心 吉林长春 吉林农业大学生命科学学院 吉林长春 吉林农业 ， 130 118) 大学中药材学院 吉林长春 ［ ］ DNA (cpDNA) Rbcl 。 ［ ］ pH 摘要 目的 获得高纯度的苜蓿叶绿体 和 基因片段 方法 采用改进的高盐低 法分离和纯化苜蓿叶绿体 DNA ; ， ， Rbcl ， 利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点 设计引物 从苜蓿叶绿体基因组中扩增 基因 利用生物学软件对测序结果进行分 。 ［ ］ ， DNA ， PCR 1 130 bp Rbcl 。 析 结果 经检测分析 获得了产率较高和纯度较好的苜蓿叶绿体 并用 方法扩增获得了 的 基因片段 该基因 17 ， 、 、 、 、 Rbcl 85． 6% ～ 90． 6%。 ［ 片段有 个常用的限制性内切酶酶切位点 与烟草 水稻 菜豆 玉米 甘薯和甜菜中 基因核苷酸的同源性为 结 ］ 。 论 为构建苜蓿叶绿体表达载体和通过叶绿体生物反应器生产药用蛋白等奠定了基础 ; DNA ; ;Rbcl ; 关键词 苜蓿 叶绿体 提取 基因 克隆 中图分类号 S 188 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611 (2011)22 － 13306 － 03 Extraction of Alfalfa Chloroplast DNA and Cloning of Rbcl Gene Fragment ZHU Hai-lin et al (Ministry of Education Engineering Research Center of Bioreactor and Pharmaceutical Development ，Jilin Agricultural Uni- versity ，Changchun ，Jilin 130118) Abstract ［Objective］The aim was to obtain high purity alfalfa chloroplast DNA and Rbcl gene fragments． ［Method］The improved high-salt and low pH method