二合一分子印迹亲和柱净化—hplc 法检测玉米中的伏马毒素（fb） 和 .pdfVIP

二合一分子印迹亲和柱净化—HPLC法检测玉米中的伏马毒素（FB） 和玉米赤霉烯酮(ZEN) 尹丽梅 1、李倩倩 1、杨海舰 1、柳家鹏 1、冯忠华 2 (1 北京华安麦科生物技术有限公司 北京 102200；2 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究 所 北京 100081) 摘 要：【目的】玉米赤霉烯酮和伏马毒素经常会同时污染玉米及其副产品，分子印迹亲和柱作为一 种快速经济的净化工具，可以为高效液相等仪器检测方法提供快速的样品前处理，从而实现饲料中 真菌毒素的快速提取和检测。【方法】本文建立了二合一分子印迹亲和柱同时净化玉米中的伏马毒 素和玉米赤霉烯酮的方法，最终用Waters 2695-2475 荧光检测器实现两种毒素的检测。【结果】该 分子印迹亲和柱对两种毒素的回收率均大于95%，而且重复使用10次，其回收率均大于90%。【结论】 分子印迹亲和柱不仅使用操作简便、回收率高，又可以多次重复使用，节约成本，是玉米中真菌毒 素快速检测简便、快速、经济实用的样品净化工具。 关键词：分子印迹亲和柱，伏马毒素，玉米赤霉烯酮，HPLC  1 引言 [1] 玉米赤霉烯酮(Zearalenone ，ZEN)又称F-2毒素，具有雌激素的作用，会导致动物不孕或流产 。 伏马菌素 (Fumonisin ，FB)也是一种霉菌毒素，对人、畜是一种促癌物，主要损害肝肾功能，能引起 马脑白质软化症和猪肺水肿等疾病[6] 。玉米赤霉烯酮和伏马毒素经常会同时污染玉米及其副产品， [2-4] 而且两者会发生致毒协同作用 。 目前高效液相色谱、气相色等仪器分析方法仍然是常用的检测真菌毒素的方式，样品前处理中 提取液的净化就显得尤为重要。如果净化不彻底，就会导致色谱图中杂峰过多，从而影响分析的灵 敏度和准确度。目前经常采用的净化工具有C18 固相萃取柱、多功能净化柱、免疫亲和柱。前两种净 化工具可以实现多种毒素同时富集，但是一些极性接近的杂质也同时会被分离出来，对数据分析造 成一定的干扰；免疫亲和柱是建立在抗原抗体特异性结合基础上的，可以达到很好的分离效果，但 成本相对较高，而且重复使用时回收率会逐渐下降，难以大规模推广。分子印迹技术的出现为真菌 毒素的快速提取和检测提供了一条新的途径，通过该技术制备与真菌毒素特异性结合的分子印迹聚 [5] 合物(molecular imprinted polymer，MIP) ，不仅成本低廉、耐高温、耐酸碱而且可以重复使用 。 本文采用伏马毒素/玉米赤霉烯酮二合一分子印迹亲和柱对玉米及其副产品等样本提取液进行 了净化，然后采用高效液相色谱荧光法分别定量检测了伏马毒素和玉米赤霉烯酮的含量。结果表明 分子印迹亲和柱的回收率达到99%，而且通过10次重复使用实验，回收率仍大于90% 。 2 材料与方法 2.1 材料与仪器 FB/ZEN二合一分子印迹亲和柱 （北京华安麦科生物技术有限公司，对FB 的柱容量为3000ng， 对ZEN 的柱容量为3000ng ）；甲醇、乙腈、乙酸（色谱级）；1.5μm玻璃纤维滤纸 （whatman公司）； FB 、ZEN标准溶液（ 美国SUPLCO公司）；饲料样本（六合饲料提供）。高效液相色谱仪配荧光检测 器 （Waters 2695-2475 ）；回旋式振荡器 （HY-5A ，江苏金坛市科兴仪器厂）；高速匀质器 （FSH-2 ， 江苏金坛荣华仪器公司） 2.2 液相条件 [7] 测定伏马毒素的液相色谱工作条件 ： 色谱分析柱： Agilent ZORBAX SB-C18 柱、5μm 、4.6mm×250mm ； 流动相：甲醇+0.1M磷酸二氢钠（77+23，V/V ），磷酸调节pH至3.3～4 ； 流速：1mL/min；进样量：20μL ；柱温:：30℃；荧光检测波长：激发 335nm ，发射 440nm 。