大鼠钙结合蛋白s100a9 基因克隆、 表达及纯化研究.pdfVIP

中国医药生物技术 2010 年 12 月第 5 卷第 6 期 Chin Med Biotechnol, December 2010, Vol. 5, No. 6 405 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.06.001 ·论著· 大鼠钙结合蛋白 S100A9 基因克隆、 表达及纯化研究 尹磊淼，宋凯，张庆华，魏颖，王宇，徐玉东，杨永清 【摘要】 1 材料与方法 目的 构建大鼠钙结合蛋白 S100A9 的原核表达质粒并获 1.1 材料 得纯化重组蛋白。 1.1.1 主要仪器 P100 PCR 仪为美国 Bio-Rad 方法 根据大鼠 S100A9 基因 mRNA 序列，设计 PCR 引 公司产品；Tanon Gis-2010 型数码凝胶图像处理系 物，常规扩增后重组连入原核表达载体 pET32a ，并进行序 统、Tanon EPS300 电泳系统为上海天能科技有限 列测定。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG ）和不同温 公司产品；THZ-03M1 空气浴恒温振荡器为上海申 度诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）鉴定结果， 能博彩生物科技有限公司产品；LRH-150 生化培养 并亲和层析纯化重组蛋白。 箱为上海一恒科学仪器有限公司产品；超净工作台 结果 PCR 扩增获得的条带与预期的 DNA 表达片段大小 为上海一恒科学仪器有限公司产品；Soniprep 150 一致，克隆构建了 pET-32a-S100A9 原核表达载体，测序结 超声破碎仪为日本 Sanyo 公司产品；离心超滤管 果与预期完全一致，经亲和层析纯化获得毫克级纯化重组蛋 为美国 Millipore 公司产品；高速落地离心机为美 白，并发现该蛋白在 21 ℃ 有比较强的表达。 国 Beckman Coulter 公司产品。 1.1.2 主要试剂 原核表达载体质粒 pET32a 购 结论 为进一步探讨 S100A9 蛋白生物学功能奠定基础。 自美国 Novagen 公司；E.coli BL21(DE3) 受体菌 【关键词】 钙结合蛋白质类； 遗传载体； 基因表达； 购自美国 Invitrogen 公司；离心柱型 PCR 产物割 自身免疫性疾病 胶回收纯化试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公 中国医药生物技术, 2010, 5(6):405-409 司；离心柱型质粒小量制备试剂盒购自上海捷瑞生 物工程有限公司；胰蛋白胨和酵母提取物购自英国 S100A9 是钙结合蛋白 S100 家族重要成员之 Oxoid 公司；100 mg/ml 氨苄青霉素、IPTG 均购 一，功能作用广泛，可高选择性、高亲和性结合 2+ 2+ 自天根生化科技有限公司；Chelating Sepharose Fast Ca 、Zn 等离子，具备细胞外和细胞内调节活性， Flow 纯化柱购自美国 GE healthcare 公司。 参与细胞迁移，花生四烯酸代谢，骨髓细胞成熟等 生物学过程[1] 。S100A9 和多种免疫性炎症疾病密 1.2 方法 1.