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Lysozyme-substrate option 材料之膽固醇定量 實驗三 食二b 林嘉慶蛋白質SDS膠電泳分子量分析 原理： SDS為變性的蛋白質電泳，可依分子量分離出不同大小的蛋白質成分，其後以CBR染色或銀染判讀結果。而SDS是界面活性劑，讓四級捲曲的蛋白質分子整個展開變性，且使周圍佈滿負電荷，以移除此會影響跑膠的因子。又因其孔徑的產生，可利用分子大小的不同以達到分離的效果 步驟： 下層製膠(Running Gel) ↓ 上層製膠(Stacking Gel) ↓ 樣品前處理 ↓ 電泳操作 ↓ 膠片暫存 討論： 1.成膠成分： a. 單体分子(monomer) b. 架橋分子(bridge) ◆a：b=37.5：1 c. 自由基(free radical)產生者 d. 催化劑 2.集膠作用 3.成膠時注意事項 * * * * * * * 原理： 酵素反應法 cholesterol esterase cholesterol ester ＋ H2O → cholesterol ＋ fatty acid cholesterol oxidase cholesterol ＋ O2 → 4-cholesten-3-one ＋ H2O2 H2O2 ＋ phenol + 4-amino-antipyrine peroxidase → red quinone ＋ 4 H2O red quinone可於500nm下測其生產量 步驟： （1） 0 10μL 0 Calibrator 10μL 0 0 Sample 1 mL 1 mL 1 mL Working reagent Sample Calibrator Blank （2）分別於37℃反應5分鐘 （3）以分光光度計測A500nm之吸光值 （4）計算Sample中膽固醇含量 結果： Concsample ＝（ODsample÷ODcalibrator）× Conccalibrator （Conccalibrator ＝ 200mg / dL，已知） ∴ Concsample ＝391mg / dL 使用之sample為十倍稀釋液 → 391mg/dL × 10 = 3910mg/dL 假設一個蛋的蛋黃為20mL， ∴其中所含之膽固醇為3910mg / dL÷5＝782mg 膽固醇測定法 食二B 杜 宜 討論： 高密度脂蛋白（HDL）與低密度脂蛋白（LDL） 正常血中總膽固醇含量應小於200mg/dL 每日攝取膽固醇含量不應超過300mg 高血脂症 膽固醇的益處 0.504 0.258 0 OD500 Sample Calibrator Blank 食二B 蕭巧馨 Glycol chitosan 經酵素水解後會產生還原糖。 將3,5-dintrosalicylic acid(yellow)-3-amino-5-nitrosalicylic acid(orange red) 0.5ml glycol chitosan 與0.5ml(0.20.40.unknown ug/ml)的lysozyme混合-在40度恆溫15min-加1mlDNS至沸水中5min-稀釋後用分光光度計測吸光值(A540nm)求unknown Unknown=0.171nm,31.387(ug/ml) 討論：1.利用標準曲線可 以求出未知物濃度。 2.DNS作為呈色劑 3.不同濃度吸光值 不同，濃度越高， 吸光值越高。 結果: 1. 2. 設蛋黃20ml，求一顆蛋的膽固醇含量 原理: 利用酵素法使材料中的Cholesterol es