高速逆流双水相色谱法纯化卵白蛋白purification of ovalbumin from .pdfVIP

21 卷 1 期 生 　物 　工 　程 　学 　报 Vol. 21 　No. 1 2005 年 1 月 Chinese Journal of Biotechnology January 　2005 高速逆流双水相色谱法纯化卵白蛋白 　 Purification of Ovalbumin from Hen Egg White by High- speed Counter-current Aqueous Two- phase Chromatography 1 2 1 1 郅文波 , 邓秋云 , 宋江楠 , 欧阳藩 1 2 1 1 ZHI Wen-Bo , DENG Qiu- Yun , SONGJiang-Nan and OUYANG Fan 1 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 ,北京 　100080 2 上海同田生化技术有限公司 ,上海 　200122 1State Key Laboratory of Biochemical Engineering , Institute of Process Engineering , CAS , Beijing 　100080 , China 2 TAUTO Biotech Co. , LTD , Shanghai 　200122 , China 摘 　要 　生物大分子的液- 固色谱纯化过程中固相载体会产生产物吸附、变性等不良影响。高速逆流色谱无需固相载体 ,且具 有高分便率和高回收率的优点 ,其中有机相水相体系在分离天然产物中应用广泛 ,而应用双水相体系分离生物大分子尚处于 研究阶段。双水相高速逆流色谱体系的建立与仪器设备及操作工艺条件密切相关 , 因此利用多分离柱高速逆流色谱仪 ,研究 了PEG1000- 无机盐双水相体系对标准蛋白质混合物以及卵白蛋白的分离。pH 值和 PEG 浓度对不同种类蛋白质的分配系数 ( ) ( ) 影响不同 ,实验发现在pH92 的 150 % WW PEG1000170 % WW 磷酸钾盐体系中 ,细胞色素 C 、溶菌酶和肌红蛋白的分 配系数差异较大 ,且分布合理 ,因而采用该体系在08mLmin 流速 ,850rmin 转速的条件下 ,成功分离了细胞色素 C 、溶菌酶和 肌红蛋白的混合物。实验也发现在 pH92 的 160 % ( WW) PEG1000170 % ( WW) 磷酸钾盐体系中 ,鸡蛋清样品中的主要 蛋白质成分 :卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系数差异最大 , 因而采用该体系在 18mLmin 流速、850rmin 转速的条件 下 ,200 min 内从鸡蛋清样品中成功分离卵白蛋白,其电泳纯度为 100 % ,收率为 95 % 。 关键词 　高速逆流色谱 , 双水相 , 蛋白质 , 卵白蛋白 , 分离纯化 ( ) 中图分类号 　TQ93 　　文献标识码 　A 　　文章编号 2005 Abstract 　High- speed counte-rcurrent chromatography ( HSCCC) is a continuous liquid-liquid partition