细胞外泌体分离纯化试剂盒 - 诺为生物.pdfVIP

细胞外泌体分离纯化试剂盒 货号：Exo107S(2 次) Exo107(10 次) 储存：直立，凉爽、避光保存。 有效期：12 个月 产品规格：每个反应可处理20mL 干细胞培养基。每个反应产生的外泌体被悬浮于50-200 µL PBS 中（外泌体RNA 和蛋白分离试剂盒，货号#EXO200，可从这些外泌体中可以获得100-1000 µg 外泌体蛋白或50-300 ng 外泌体RNA ）。 产品介绍：该产品仅用于科学研究。用于从干细胞培养基 （上清液）中分离外泌体。  简单易用：无需超高速离心机离心（2h ）；  高回收率：得到的外泌体是传统离心或其它试剂盒的10 倍。  节约成本：（相比于磁珠法）；  高纯度：分离的外泌体纯度高达95% 以上；  形态完整：分离的外泌体保持完整的形态和功能； 用 20 mL 干细胞培养基获得的高纯度外泌体可用于下游应用：电镜研究，外泌体标记，外泌 体亚群分析，外泌体miRNAs 的qRT-PCR 分析，外泌体蛋白凝胶电泳等。 产品组份：（室温保存） 体积 组份 Cat. #: EXO107S Cat. #: EXO107 Solution A (blue) 1.5 mL 7.5 mL Solution B 1.5 mL 7.5 mL Solution C 6.0 mL 10 mL x 3 bottles PureExo® Column 2 10 *每次使用后立即盖好瓶盖避免蒸发。 分离流程 样本准备：  FBS （胎牛血清）包含大量的外泌体，这些外泌体会污染细胞来源的外泌体，因此分离外 泌体使用的培养基是分离前驯化细胞48 小时的无血清培养基。 1. 收集20mL 细胞培养基。 2. 将培养基于4 ℃，3000x g 离心15 分钟，弃去碎片。 注：不做这步，可能会导致步骤14 中柱子堵塞。 3. 将20 mL 上清液转移至新50 mL 离心管 （试管1）中并置于冰上。 北京诺为生物技术有限公司 电话：010 E-mail: nwbiotec@ 地址：北京市海淀区上地信息路15 号608 1 *每个反应的培养基最大体积是20 mL，最多1 x 107 细胞。不要超过建议的样本体积或细胞数 量。否则可能引起分层界面不明显和柱子等堵塞问题。一根纯化柱子仅能使用一次。 4. 在另外一根50 mL 离心管中按以下顺序一次加入溶液A/B/C ，配成A/B/C 混合液 （使用前 准备）。 1）、溶液A: 0.75 mL ； 2 ）、溶液B ：0.75 mL ； 3 ）、溶液C: 3.0 mL *取完试剂后立即盖好盖子避免蒸发。 反应体积表（每个反应）： 细胞培养基(上清液) A/B/C 混合液 = 溶液 A + 溶液 B + 溶液 C 2 mL (最小) 0.750 mL = 0.125 mL + 0.125 mL + 0.50 mL 3 mL 1.125 mL = 0.187 mL + 0.187 mL + 0.75 mL 4 mL (最大) 1.500 mL = 0.250 mL + 0.250 mL + 1.00 mL 5. 涡旋试管2 （4.5 mLA/B/C 混合液）5-10 secs，得到均一的溶液。 6. 将试管2 中的4.5 mLA/B/C 混合液转移到试管1 中 （20 mL 无细胞培养基）。 7. 轻轻盖好试管1，涡旋混匀30 secs，然后4 ℃孵育30 min 。 8a. 现在混合液分为三层：吸取上面有颜色层并弃掉，不要打破中间蓬松层。然后到第9 步骤。 顶部有颜色层 中间蓬松层（外泌体富集层）