陆地棉ghsumo基因的克隆与黄萎病菌诱导表达分析 - 天恩泽.pdf

基因组学与应用生物学，2011年，第30卷，第4期，第359—364页 GenornicsandAppliedBiology，2011，Vo1．30，No．4，359 364 研究报告 A Letter 陆地棉GhSUMO基因的克隆与黄萎病菌诱导表达分析 赵付安 -，z 房卫平 杨晓杰 谢德意 李武 吕淑萍 1河南省农业科学院经济作物研究所，郑州，4500021；2河南大学生命科学学院，开封，475100 通讯作者，Fangweiping@371．net 摘 要 SUMO化修饰与植物抗病防御、信号转导和耐旱等有着直接 的关系。本文 以抑制差减杂交(sup— Dressionsubtractivehybridization，SSH)技术获得 SUMO的EST为信息探针，对棉花 EST数据库进行同源 有哪些信誉好的足球投注网站和 电子克隆，获得了全长为396bp的SUMO基因编码区 cDNA全长，我们将该基因命名为 GhSUMO，推 测该基因编码 95个氨基酸 。分别以抗黄萎病陆地棉品种豫棉 21号的cDNA和DNA为模板，对该基因进 行了PCR扩增验证，测序结果表明，GhSUMO基因序列与电子克隆序列一致，且没有 内含子 。蛋 白序列分 析表明，该蛋白具有保守泛素结构域和 C端双 Gly的断裂 ／连接位点，以及保守的疏水表面和 Ulpl—Smt3 互作位点。系统进化分析表明，该蛋 白与蓖麻的同源序列表现了最高的相似性，与其它双子叶植物同源序 列次之，而与 子叶植物的相似性较低。棉苗接菌后实时定量 PCR结果显示，该基因表达量在接黄萎病 菌的量 48h后 明显上调，96h达到未接菌对照的5倍 以上 。GhSUMO基因可受黄萎病菌诱导表达 ，表 明该 基因在陆地棉抗黄萎病的机制 中可能发挥重要作用 。 关键词 陆地棉，GhSUMO基因，电子克隆，诱导表达，定量PCR CloningandExpressionAnalysisofGhSUMOGenefrom UplandCottonIn— oculatedwithVerticillium dahliaeKleb ZhaoFu’an FangWeiping YangXiaojie XieDeyi LiWu LvShuping 1InstituteofCashCropsReseach，HenanAcademyofAgriculturalScience，Zhengzhou，450002；2CollegeofLifeScience，HenanUniversity，Kaifeng， 4751O0 Correspondingauthor，Fangweiping@371．net DOI：1O．3969／gab030．000359 Abstract Asanimportantpost-translationalmodification，sumoylationSUM O participatesinanumberofbio— logicalprocesses，includingplantdiseaseresistance，signaltransductionanddroughttoleranceeta1．UsinganEST ofasmallubiquitin—relatedmodifiergeneasthequeryprobetoblastcottonEST database，aSUMO gene，witha completeopenreadingrfagment(ORF)396bpencodingaproteinof95aminoacids，wassuccessfullyobtainedin silicocloningandwasnamedGhSUMO．TheGhSUMO genewasverifiedbyPCR amplificationsusingthecDNA andDNA templatesfrom therootofuplandcottonYumian21，whichwasofresistancetoVerticillium wiltand ， sequencingresultsshowedthattheGhSUMOhadnointron．Sequenceanalysisshowedthattheproteinha