利用绿色荧光蛋白建立包涵体变- 复性新方法 - 上海伯豪生物技术有限 .pdfVIP

※生物工程 食品科学 2010, Vol. 31, No. 05 141 利用绿色荧光蛋白建立包涵体变- 复性新方法 1 1 1 2 1 3 1, 3 , 张 颋 ，冯延叶 ，沈亚领 ，金维荣 ，杨 忠 ，王菊芳 ，王小宁 * ( 1. 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237 ；2 . 生物芯片上海国家工程研究中心，上海 20 1203 ；3. 华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 5 10006) 摘 要：为提高常规稀释复性方法的复性效率，以重组绿色荧光蛋白(green flu orescent protein ，GFP)包涵体为模 型，开发一种新的双变性- 稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GF P 包涵 体，通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白，再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白，随后进行稀释复 性。结果显示：与常规方法比，新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5 ～2 .3 倍，复性蛋白对温度、溶 液酸碱度及变性剂的稳定性提高。增强型绿色荧光蛋白(enh an ced GFP ，EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法 进行复性，均取得80% 以上的活性回收率，说明新方法对GFP 系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性。新方法 从变性剂使用与包涵体结构的关系出发，突破常规操作中变性剂单次使用的局限，既保留了简便性又提高了常规 稀释复性方法的效率。 关键词：大肠杆菌；包涵体；变性；复性；绿色荧光蛋白 Development of A Novel Refolding Method Using Inclusion Bodies from Green Fluorescent Protein 1 1 1 2 ZHAN G Tin g ，FENG Y an -y e ，SHEN Ya-lin g ，JIN Wei-ron g ， 1 3 1,3, YANG Zhong ，WANG Ju-fang ，WANG Xiao-ning * (1. The State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China ；2. National Engineering Center for Biochip at Shanghai, Shanghai 20 1203, China ；3. School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China) Abstract：Target proteins overexpressed in Escherichia coli often result in the formation of inclusion bodies, which need further refolding in vitro to gain their native struc