module1：实时荧光定量pcr技术原理 - thermo fisher scientific.pdf

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2017-08-02 发布于天津
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Module1：实时荧光定量PCR技术原理 The world leader in serving science 1 什么是实时荧光定量PCR? •一种实时监控核酸扩增的技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化对PCR过程进行实时监控，以此实现对初始模板的定量分析。 2 定量PCR如何工作? • PCR反应液加入了各种类型的荧光标记物一个PCR循环 3 定量PCR如何工作? • 在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强 PCR PCR PCR 产物大量PCR产物 4 定量PCR仪如何工作? •所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分 2. 光路系统 3. 检测器 1. 热循环模块 5 PCR如何工作? 循环结束后,定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增循环1 滤光片A 样品1 Level: PCR如何工作? 后,定量PCR软件计算出数据，用于实验结果的分析定量PCR的化学原理两种化学方法 TaqMan探针法染料法 9 TaqMan探针法 •TaqMan水解探针：5′端荧光报告基团与靶基因特异性结合的序列 3′端荧光淬灭基团报告基团淬灭基团 10 TaqMan水解探针作用机理 •完整的探针： •切断的探针：检测不到报告荧光检测到报告荧光激发光激发光能量荧光共振能量转移，FRET