出口海水网箱养殖鱼类病害调查探究.docVIP

出口海水网箱养殖鱼类病害调查探究摘要：为了提高海水养殖鱼类品质、规范养殖生产、减少养殖自身污染、保障鱼类食用安全和出口质量，本文作者开展了“出口海水网箱养殖鱼类的病害研究及防治对策”项目的研究。对浙江省台州海域8个养殖区域进行实地调查，及时取样，实验与分析相结合的方法，通过各县水产技术推广站每年提供的数据等获取流行病学资料，按流行病学统计方法进行资料分析和处理。结果显示，海水网箱养殖鱼类细菌性病害仍是危害养殖生产的最常见、影响最大、经济损失最严重的病害。为此，本文作者以浙江省地方标准(DB／T5682005)“深水网箱无公害鱼类养殖技术规范”为依据，结合台州海区潮流、岛礁海湾屏障条件、海水网箱类型以及排列方式，本文作者设计了通用性的、生态性的、调控性的海水鱼类健康养殖技术模式及其操作规范，以期达到对养殖鱼类病害实行综合防控，保障海水网箱养殖鱼类的质量安全。 关键词：养殖鱼类；病害调查；综合防控 中图分类号：S941　文献标识码：A　文章编号：1674－0432(2011)－05－0309－3 为了提高海水养殖鱼类品质、规范养殖生产、减少养殖自身污染、保障鱼类食用安全和出口质量，本文作者开展了出口海水网箱养殖鱼类的病害调查研究。对浙江省台州海域8个养殖区域(其中玉环5个、温岭2个、乐清1个)进行周年实地调查，及时取样，实验与分析相结合的方法，通过相关县市水产技术推广站每年提供的数据等获取流行病学资料，按流行病学统计方法进行资料分析和处理。结果显示，海水网箱养殖鱼类细菌性病害仍是危害养殖生产的最常见、影响最大、经济损失最严重的病害。 1　实验对象和方法 1.1实验对象 以鲈鱼、美国红鱼、黑鲷、真鲷等主要品种为调查实验对象。分4个不同季节对8个养殖区域随机抽样检测分析。 1.2常规检测方法 肉眼观察：主要观察鱼类外观症状如长短、粗细、体形，体表及鳍条有否破溃、附着物、缺损、充出血、肿块；鳃盖有否肿大，肛门是否红肿等。解剖检查：将鱼置于白搪瓷盘中从排泄孔处解剖，检查各脏器；打开鳃盖，检查鳃部。显微镜检查：体表刮取少量粘液置于载玻片上，加滴蒸馏水，盖上盖玻片制成水封片于显微镜下镜检；用剪刀剪取部分鳃丝做成水封片镜检；剪开肠管，刮取前中后肠壁上的粘液和内容物做成水封片镜检；剪取少量后。肾组织做成水封片镜检。细菌培养纯化和药物敏感试验：在无菌状态下剪取病鳗体组织，接种于选择性细菌培养基上(如糊精品红培养基、RS培养基、AOA培养基)，适当温度下培养并纯化，用于药物敏感试验。 1.3快速检测手段 1.3.1血清学凝集反应在一定的电解质存在下，抗原吸附其相应抗体而发生凝集块的过程。多种凝集技术已应用于鱼类的细菌病诊断。凝集反应的灵敏度虽然低一些，但速度快，几小时即可获得结果，不仅适用于实验室，也可用于养殖场实地诊断。以(Yoshimizu pokimura，1985)协同凝集反应技术为例：①配制抗体致敏葡萄球菌(sensitizel staphylococuil)；②取病鱼肝、肾或病灶组织，加4 9滴PBS液，匀浆；③经4000r／min离心后，取上清液；④在玻片上加1滴组织上清液，1滴抗体致敏的葡萄球菌悬液，混匀后置于湿盒内反应30－90min；⑤肉眼或低倍显微镜检查结果，凝集反应阳性则表示组织内含有抗体相应的病原。 1.3.2免疫荧光抗体技术采用荧光色素标记免疫球蛋白，抗体与荧光色素经化学偶合后，仍然保持其免疫学反应特性，荧光标记的抗体，能鉴定组织涂片的病原体，不需从病鱼中分离病原。以Rogers 1981年鉴别E.i ctaluri为例，简述其方法：①从病鱼肝、肾或病灶取一小块组织，在玻片上涂片，晾干，60℃微热固定；②加几滴免抗E.ictaluri血清于玻片上，于室温5min，最好放置在一避光潮湿的容器内；③用PH7.2磷酸盐缓冲液(PBＳ)冲洗；④加几滴异硫氰酸荧光素标记的羊抗免IgG放置5min；⑤用PBS冲洗、晾干；⑥加1滴封闭液，覆上盖玻片，在荧光显微镜下检查。如在涂片的不同部位，显现苹果绿颜色荧光即表示存在E.ictaluri病原。 1.3.3免疫酶标吸附试验(ELISA)方法与荧光标记抗体诊断法类似，采用酶标记抗体作为示踪抗体。酶联免疫吸附检测方法：多采用13cm×8cm的96孔微量酶标板，它可检测鱼体组织内的病原体，亦可检测其血清中相应的抗体水平，以推断鱼体是否感染过病原菌。以Adams等(1990)诊断A.salmonicida为例，简述该方法：①加100μ1抗A.salmonicida血清缓冲液(每毫升缓冲液含5μg免疫球蛋白)到板孔内，塑料薄膜密封后放置过夜；②取出病鱼的肝脏，肾或病灶组织，加8倍磷酸缓冲液匀浆，取上清液；⑧加100μ1 0.2