血液标本的收集和保存方法.pdf

血液标本的收集和保存方法 说明：一般建议用新鲜的血液标本进行实验。如果标本已经保存较长时间，请联系康成公司技术部， 以确认样本是否适合进行实验。 一、 全血收集 请按照实际使用的收集方法，如注射器收集或真空收集管等，参考相应的厂商提供产品说明进行操 作。采集好全血，将采集好的全血转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可 放入- 20°C 或- 70°C冰箱。长期保存，请放入液氮。 二、 血浆收集 为获得血浆进行实验，应使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g离心10分钟，分离血浆 和细胞组分。将采集好的血浆转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放 入- 20°C 或- 70°C冰箱。长期保存，请放入液氮。 图片来源：Exiqon ‘ Quantification of MicroRNA expression in Blood Plasma/Serum Samples’ 注意：血浆收集应使用抗凝管，抗凝剂可以用柠檬酸钠或EDTA等，但一定不要使用肝素抗凝，因为 肝素对RNA实验有较大影响 三、 血清收集 为获得血清进行实验，应使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清。采血后轻轻倒转采血管 混合4~5次，直立置于室温待血液完全凝固（一般约一小时），1000g离心10分钟，分离血清。将采 集好的血清转移至单独的冻存管，按照每400~500ul/管分装好。短期保存，可放入- 20°C 或- 70°C冰 箱。长期保存，请放入液氮。 四、 血清、血浆和全血样本的保存和运输 → microRNA芯片检测血清、血浆或全血标本约需要1~2ml的量（即每份样品2~4管）。 → 在样品保存及转移的过程中，应避免反复冻融样品。 → 运输过程必须使用足量干冰保证始终低温。干冰量至少为 8 公斤（足量），且运输用厚壁泡沫 箱，且需用封箱带密封。 注： 保存血清，血浆或者全血所使用的 1.5 ml 冻存管或离心管，操作中使用的枪头等必须高温灭菌，装 好样品后管口需要以封口膜封好。 参考文献： 1. Signature microRNA Expression Profile of Essential Hypertension and Its Novel Link to  Human Cytomegalovirus Infection. Li S., et al., Circulation, 2011. 2. Characterization of microRNAs in serum: a novel class of biomarkers for diagnosis of  cancer and other diseases. Xi C., et al., Cell Research, 2008.  附：TRI 抽提 RNA protocol  → 如果条件允许，亦可采用TRI Reagent BD保存全血、血浆和血清，并抽提其中的RNA → TRI Reagent BD （For processing whole blood, plasma, or serum）可以从Sigma或者 MRC(Molecular Research Center)订购 1、 RNA 的抽提  采用 TRI Reagent BD 从全血、血浆和血清中抽提 RNA，整个过程可以在 1 小时内完成，完整的 RNA 的得率比其他的抽提方法高 30－150％。其他方法抽提的 RNA 的完整性都不如TRI Reagent  BD，特别是采用柱离心式抽提方法很可能改变 RNA 的组成。TRI Reagent BD 尤其适用于抽提病 ＋ 毒 RNA。抽提得到的 RNA 可用于 northern、dot  blot  bybridization、poly A  selection、in vitro  translation 、RNase protection assay、molecular cloning 和 PCR。    实验方法  需要自备的试剂：1‐bromo‐3‐chloropropane （溴氯丙烷，BCP）或氯仿、异丙醇、乙醇和 5N 醋 酸  建议使用一次性的聚丙烯离心管，并可承受 12,000g 离心。    1、裂解：0.75ml TRI Reag