兽医临床致病性大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnI1uiA ．Sci．2008，36(30)：13062—13063 责任编辑 金琼琼 责任校对 马君叶 兽医临床致病性大肠杆菌超广谱 D一内酰胺酶的检测 张舂樨 ，-，张晓根 ，唐桂芬 (1．郑州牧业工程高等专科学校，河南郑州45ool】；2．西北农林科技大学，陕西杨凌7121x(】) 摘要 [目的]指导临床合理用药，控制兽医临床的感染性疾病。[方法]用分子生物学方法对用双纸片协同法检测产生ESBEs的5株猪 鸡致病性大肠杆菌进行 了ESBEs的检测。[结果]产生KSBLs的猪鸡致病性大肠杆菌中都扩增 出了TEM型引物。[结论]双纸片协 同法 检测ESBL~具有较高的可靠性，兽医临床大肠杆菌已经产生EsBk。 关键词 超广谱 G一内酰胺酶 ；大肠杆菌；耐药性；检测 中图分类号 $85269 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2008)3o一13062—02 DetectionofESB inveterinarylnclinicalPatll 伽 ityEscherichiacoli 2H ^NGChun-huietal (Zheng~ho．CollegeofAn1】alHusbandryEngineering，Zhengzhou，Henan450011) Abstract f0bliectivelTheaimofthispaperwastoinsturcttheclinicalrationaldrugllse，controlveterinaryinelinicalinfectiousdiseases．1Mehtodj MolecularbiologicalmehtodwasusedtoconducttheESBk detectionon5strainsofswineandavianpathogenicE．coli．whicheouldproduceESBI．sunder thedetectionofdouble—diskmehtod．[ResultJTEMprimerwasamplifiedfromhteswineandavinapathogenicE．coli，whichcouldproduceESBLs．【Con— elusionIThedouble—diskmehtodforEsBLsdetectionwashighlyreliable．VeterinaryinclinicalE．∞ couldproduceESB ． Keywords ESBb ：Escherichiacol；Drugresistnace；Detection 研究表明：革兰氏阴性杆菌对3代头孢菌素产生耐药性 司；YEAR2000PCR仪 ，德国Biometra公司。 的机理主要是产生了超广谱 一内酰胺酶(Extendspectrum ． 1．2 方法[5—6] 1actamses，ESBLs)…，产生 EsRIJs的耐药菌株逐年增多，且有 1．2．1 引物设计。参照 GenBank公布的TEM型和 SHV型 交叉耐药和多重耐药现象，产生 ESBLs的细菌携带 EsBL．s质 ESBLs基 因设计并合成 以下 2对 引物。TEn：上游引物 5一 粒的同时可能带有对喹诺酮类 、氨基糖苷类和磺胺类等药物 GA研 rcAAClAT丌℃(明 GC．3，下游 引物 5-TAC~ 一 的多种耐药基因，使其具有多种耐药表型，给临床治疗带来 TAAW_AGTGAGCA2—3；SHV：上游 引物 5一 严重的威胁 2。但用常规药敏方法检测时，产生 ESBLs细菌 3b3G-3，下游引物5-TrAGCG33FA2CAG3VL33~ATC一3。上述引物 只表现为最小抑菌浓度 (MIC)值轻度升高和K—B法抑菌环 均由上海宝生物工程技术服务有限公7司合成。 稍减小，实验室判断未能达到耐药界限l3J。ESBI_s的检测可 1．2．2 质粒提取。取 37℃振荡过夜培养的菌液，13000 以较好地补充常规药敏 的不足_4J。EsBIJs的检测方法 中， r／minN心30s，加入250 l溶液P1重悬菌体 ，加入250 溶 PCR、琼脂糖凝胶电泳等分子生物学方法用低聚核苷酸