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离子色谱荧光检测法测定肾上腺素和多巴胺 1 2 ! 2 1 2 童裳伦 朱 岩 郭 丹 项光宏 叶明立 1 2 （浙江大学玉泉校区环境科学研究所，杭州 310027 ） （浙江大学西溪校区化学系，杭州 310028） ! 引 言 多巴、多巴胺、肾上腺素与去甲肾上腺素等统称为儿茶酚胺类物质，它们都是由酪氨酸衍生而来的系列物。儿茶酚 胺作为神经递质和激素，与人们的健康与疾病有密切关系，它们不仅直接参与行为活动以及参与血压、心率、呼吸和睡眠 等植物神经功能的调控，而且还与一些功能性疾病如神经分裂症、忧郁症以及器质性病变的出现有关。儿茶酚胺的分析 研究始于 世纪 年代，早期的测定方法主要是三羟基吲哚法和乙二胺缩合法。随着人们对儿茶酚胺研究的深入，又 20 40 报道了许多测定方法，如放射酶学法、气相色谱法、色质联用法、高效液相色谱法以及稀土离子荧光探针法等。本研究对 酪氨酸衍生而来的儿茶酚胺系列物进行分离测定，建立了离子色谱荧光检测法对肾上腺素和多巴胺的测定方法。 实验部分 仪器和试剂 离子色谱仪，配以 荧光检测器（日本岛津公司）， 保护柱， . ! Dionex 4000i RF-535 Dionex OmniPac PCX-500 分离柱（ ）， 进样阀；肾上腺素（ ， ）；多巴胺（ ， Dionex OmniPac PCX-500 2 mm X 50 mm rheodyne-715 97 % HPLC FIuka 99 % FIuka）；全部溶液，包括淋洗液和标准液均用分析纯试剂和二次去离子水配制。 色谱条件 淋洗液： ， ；流速 ；荧光检测器激发波长为 ，发射波长为 . 0 .05 moI/ L HCI 0 .05 V/ V ACN 1 mL/ min 280 nm 320 nm；进样体积25 L。 ! # 结果与讨论 # . ! 荧光检测条件 分别对肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、多巴的荧光发射波长和激发波长进行扫描，得到上述物 质的最佳激发波长与发射波长非常接近，激发波长在280 ~ 283 nm 之间，发射波长在316 ~ 320 nm 之间，实验中固定荧光 检测器的激发波长为280 nm，发射波长为320 nm。 流动相组成的优化 将 浓度固定为 ，实验了不同浓度的 溶液对保留时间与分辨率的影响，实验 # . ACN 0 . 10 V/ V HCI 结果表明， 浓度为 时的被测物分辨率较高，符合分离要求，且保留时间较小，故淋洗液中 的适宜浓度 HCI 0 .05 moI/ L HCI 为0 .05 moI/ L；将HCI 浓度固定为0 .05 moI/ L，试验了不同浓度的ACN 溶液对保留时间与分辨率的影响，实验结果表明， ACN 浓度为0 . 05 V/ V 时的被测物分辨率较高，符合分离要求，且保留时间较小，故淋洗液中ACN 的适宜浓度为0 . 05 。从以上实验结果可以看出，流动相选择 ， ，肾上腺素能与多巴胺完全分离，因此可对 V/ V