同步化法处理软骨细胞后对病毒转染效率影响的研究.pdfVIP

中国药物与临床2008年 11月第8卷第 11期ChineseRemedies＆Clinics，November2008，Vo1．8，No．11 ·849 · 同步化法处理软骨细胞后对病毒转染效率影响的研究 刘 君 向 川 卫小春 【摘 要】 目的 探讨同步化法对反转录病毒转染软骨细胞效率的影响。方法 将构建并经过包装后的反 转录病毒载体转染到经低温处理后的同步化兔膝关节软骨细胞 ，运用免疫荧光显微镜观察荧光显色，并用硝酸 还原法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量，并与非同步化转染组对照，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细 胞培养液中人白细胞介素一1受体 (hIL—IRa)的表达量，与非同步化的细胞上清液中hIL一1Ra的含量做空白对照。 结果 酶切鉴定重组基因正确；免疫荧光显微镜观察可见绿色荧光显色；同步化组上清液中NO含量为(145~3) I~mol／L，非同步化组上清液中NO含量为(89±3)I~molL／；同步化组上清液中的hIL一1Ra的含量为(65~4)ngL／，职 显高于非同步化组上清液中的hIL一1Ra的含量 (41~3)ng／L(PO．05)。结论 软骨细胞经同步化后能显著提高反 转录病毒载体的转染效率。 【关键词】 软骨细胞；逆转录病毒科；转染；同步化 Efficiencyofretrovirustransfectionintoarticularchondrocytestreatedwithsynchronization LIUJumXIANG ChuanWEIXiao-chun．DepartmentofOrthopedics，SecondAffiliatedHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan 030001。China A【bstract】0bjective Tostudytheeffectsofsynchronizationontheefficiencyofretrovirustransfectionintoar— ticularchondrocytestreatedwithsynchronization． Methods Constructedandpackedretroviurscarrierwasemployed totransfectkneearticularchondrocytestreatedwithtemperaturesynchronization． F1uorescenceimagingwasobserved withanimmunofluorescencemicroscope． NO contentsinculturemediumweredetectedwithnitric—reductionassay， expressionofhlL—lRainculturemedium byELISA． andthefindingswerecomparedwiththosefrom non—synchro． nizationgroup．Results Enzymedigestionconfirmedtherecombinationtobeasdesired．Greenfluorescencewasvisi— bleunderimmunofluorescencemicroscopy．TheNOcontentsiflsupernatantwas f145~3)lxmol／Linsynchronization groupVS (89~3)lxmol／Linnon—synchronizationgroup．ThehlL—iRacontentsinsupernatantwas (65~4)ng／Linsyn— chronizationgroupVS(41~3)ng／Linthenon-synchronizationgroupsignificancefp0．05)．Conclusion Synchronization obviouslyimprovedtransfectionefficiencyofretroviruscarrier． K【eywords】Chondrocytes；Retroviridae；Transfectio