实验二+环境中微生物的检查.pptVIP

六、思考题 P14(4) 通过本次实验，在防止培养基的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么？有什么体会？ 1. 培养基配好后，为什么必须立即灭菌（P54，第1题） 2. 在配制培养基的操作过程中应注意什么问题（P54，第2题） 3. 高压灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降为零时才能打开排气阀，开锅取物？（P66，第1题） * * 实验二 环境中微生物的检查及油镜的使用 一、目的要求 1. 证明微生物存在的广泛性，体会无菌操作的重要性。 2. 比较来自不同场所细菌的数量、种类和菌落特征。 3. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。 二、基本原理 微生物广泛存在 培养基含有微生物生长所需的营养，接种到平板上的微生物因种类不同，所形成的菌落特征也不相同，可通过平板培养检查微生物的数量和类型。 2 镜油的作用 折射率：空气1.0、水1.33、 香柏油1.52、玻璃1.55 （1）增加照明亮度 （2）增加分辨率 镜油作为介质可使物镜的数字孔径增大，从而增加分辨率。 光学显微镜在使用最短波长的可见光(λ=450nm)作为光源时可达到最大分辨率：0.18μm；因为人肉眼的正常分辨能力为0.25mm，因此光学显微镜最大放大倍数只能达到1000-1500倍。 分辨率=0.5λ/nsin θ 工作距离：0.1mm 分辨率=0.5λ/nsin θ λ：光源波长 θ：物镜镜口角的半数 n：玻片与物镜间介质的折射率 n·sinθ：数值孔径值 θ 是决定物镜性能的的最重要指标 3.油镜的使用方法 （1）先用低倍镜、高倍镜找到要观察的样品区域; （2）移开物镜，滴香柏油; (3）然后将油镜转到工作位置，油镜就会浸在香柏油中; （4）用微调节器调节，直至视野中出现清晰物象。 三、实验材料 培养基及药品：牛肉膏蛋白胨培养 基、香柏油、二甲苯。 2. 器材及其他用具：显微镜、无菌平皿、酒精灯、镜头纸、标准片等。 四、实验内容 1. 倒平板：每平板倒入培养基约15mL，冷凝 2. 写标签：标明班级、姓名、样品来源、日 期，贴在皿底的一边。 3. 环境中细菌检查 1）空气：移去平板的皿盖，30min后盖上皿盖。 2）超净工作台中：将一平板放在超净工作台 上，移去皿盖，30min后盖上皿盖。 3）手指：在平板上划两个区，分别在洗手前、 后在两个区域中按手印，盖上皿盖。 4）任选一物品：头发、饭卡、钱币、衣物、手帕等， 接种后盖上皿盖 五、结果观察 参照教材中的表格，以每组为单位，描述菌落的特 征、类型及数量。 2. 比较哪种来源的样品的平板菌落数与类型最多。 头发上的细菌 头发和手指上的细菌 上次实验习题解答 配制培养基的原料、药品及自来水中含有大量的微生物，培养基中营养丰富，适合一些微生物的生长繁殖。培养基配好后若不及时灭菌（特别是高温季节），会导致微生物在培养基中的大量繁殖，不仅营养物质被消耗，而且培养基酸化，pH下降，灭菌后琼脂不凝固，已不适合对目的微生物的培养。所以，培养基配好后，为什么必须立即灭菌。 （1）药品称量 蛋白胨很易吸潮、称取时动作要迅速。称药时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，瓶盖也不要盖错。 （2）药品融化 在琼脂融化过程中，应控制火力，以免培养基益出，不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦；不可用铜锅或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响微生物生长。 （3）调pH: pH不要挑过头，以免回调而影响培养基的离子浓度。 （4）分装 分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾染棉塞而引起污染，若已沾上，可用报纸、纱布擦净等。 （5）灭菌 含糖培养基和非含糖培养基要分别灭菌，使用不同的温度和时间，灭菌要及时、彻底，按时出锅，以防棉塞潮湿。 空气的膨胀压力大于水蒸汽的压力，当蒸气中含有空气时，在同一压力下，含蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。锅内冷空气若不排尽，压力表指针所指位置只代表压力，不代表同一点的温度，实际温度比压力表指针所指位置的温度低得多。所以高压灭菌开始之前，要将锅内冷空气排尽。 当压力没降为零时打开排气阀，会出现由于试管（三角瓶、培养袋）内压力高于试管（三角瓶、培养袋）外，而出现棉塞脱落、培养基外溢、涨袋等现象，导致灭菌失败。 *