显微镜实用技术培训.PDF

显微镜实用技术培训 Hbchendl 学会操作显微镜  一、普通光显微镜的调整方法及原理。  二、使用CCD相机拍摄显微镜照片。  三、荧光样品的观察与拍摄。 显微镜的主要组成部分  光源  聚光镜  载物台  物镜  照相机接口及相机  荧光照明组件  荧光观察滤光片 一、普通光显微镜的调整  1.1调整光源  1.2调整聚光镜  1.3选择物镜  1.4对焦观察 1.1显微镜光源部件 亮度指示 光线出射口 亮度调整旋纽 光源滤光片 调整光源的原则  需要把灯光调整为亮度适当的白色光。  色度控制：  1.需要在光路中加蓝色滤光片。  2.灯泡电压在9伏附近。  电压过高，色彩偏蓝。  电压过低，色彩偏黄。 色温：评价白色的定量指标  高温发光体的色彩与其温度相关。温度高的色彩 偏蓝，温度低的偏黄，偏红。  白天晴天下阳光的色彩为“纯正的”白色。因此 以太阳表面温度6000K为纯正白色的温度。  几乎所有的灯光都达不到这个温度，需要用滤光 片进行色彩调整，另外通过调整光源电压能对色 温进行细致的调整，从而得到纯白色的照明。 影像亮度如何控制？  使用调整光源电压的方法会影响光源的色彩。  正确的方法是用灰度滤光片减光。  有ND25与ND6两种，分别能减低亮度至 25%与6%。另一个LBD是蓝色滤光片。 1.2聚光镜：决定图像清晰程度  高档一点的显微镜都是使用柯勒式聚光模 式。如果聚光镜调整不正确，图像是调不 清晰的。  聚光镜系统包括：  聚光镜光阑  聚光镜  视场光阑 柯勒式聚焦方法  调整载物台高度使样品初步对准焦距。  读取物镜指数，调聚光镜光阑数值为物镜 指数的80% 。  将视场光阑调至最小；  聚光镜升至最高，然后慢慢向下调，同时 在目镜中观察，直到视野中出现视场光阑 的影像，并且边缘清晰为止。  放大视场光阑，至到光阑边缘扩张出视野。 柯勒式聚集调整方法 清晰的视场光阑像 3.调整使 1.按数 4.放大使光阑 2.缩小 光阑清晰 字选择 像扩出视野 1.3调整载物台对焦  使用高倍镜时避免压破玻片。  使用油镜后必须及时用二甲苯擦净镜头。  高倍镜对焦距时，先将载物台升至最高， 然后一边观察一边缓降载物台对焦。  载玻片上的样品必须盖上盖玻片。所有的 镜头光路都是针对有盖玻片的样品设计的。 1.4物镜选择  高倍镜：分辨率高，视野窄  低倍镜：分辨率低，视野大。  每次更换物镜后都需要重新调整聚光镜  40X / 0.75 意思是40倍镜，镜头指数0.75 二、使用CCD拍摄显微镜图片  2.1选择图片参数  2.2调整色彩  2.3调整亮度 2.1电子图片  象素：一百万左右象素即可。一般不必更 大。画面尺寸在1000X1000左右。  保存好TIFF格式的原始图片，不要使用任何 软件对原始图片作任何编辑处理。  避免使用photoshop修饰图片。  可以对图片进行剪裁、调整亮度对比度的 操作。  可以使用专业图片分析软件上的