增殖腺病毒SG600-IL24与非增殖腺病毒Ad-IL24的抗肿瘤效果比较.pdfVIP

浙江理工大学学报，第25卷，第1期，2008年1月 Journal of Zhejiang Sci—Tech University Vo1．25，NO．1，Jan．2008 文章编号：1673—3851(2008)01 0113—06 增殖腺病毒SG6 O O—IL2 4与非增殖腺病毒 Ad—IL2 4的抗肿瘤效果比较 那曼丽 ，陈东锋 ，苏长青 ，李林芳 ，吴红平 ，钱炎珍 ，姜梨华 ，钱其军 ， (1．浙江理工大学新元医学研究所，杭州310018；2．第二军医大学东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室，上海200438) 摘 要：利用DNA克隆和重组技术．构建增殖腺病毒 SG600一IL24。ELISA检测比较 SG600一IL24和非增殖腺 病毒Ad—II 24分别感染肝癌细胞BEL一7402、Hep3B、HepGII、SK—Hep—l和成纤维细胞BJ细胞后II 24的表达量，表 明SG600一II 24病毒能在肿瘤细胞内大量表达II 一24，最高可达773 ng／mL(MOI一1)，且在多数肿瘤细胞内IL24表 达量显著高于Ad—IL24，而在正常细胞内表达量与Ad—II 24基本相同。半数组织感染剂量(TCID 。)法检测SG600一 II 24 48 h和96 h的增殖情况，发现SG600一II 24可在上述4种肿瘤细胞内大量增殖，96 h的最高增殖倍数可达到 246153。MTT法和 CPE法对比 SG600 II 24和 Ad—IL24对不同细胞的杀伤作用结果显示上述 4种肿瘤细胞 SG600一IL24对上述4种肿瘤细胞的5O 杀伤剂量(IC5。)和 90 杀伤剂量(IC 。)均明显低于Ad—II 24。以上结果表 明SG600 IL24体现了病毒治疗与基因治疗的双重抗肿瘤用，其效果明显好于Ad—II 24，为该病毒治疗肝癌的体内研 究打下基础。 关键词：端粒酶逆转录酶；缺氧反应元件；增殖腺病毒；II 24；肝癌 中图分类号：R73—362 文献标识码：A 0 引 言 增殖型腺病毒又称条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus，CRAd)，用于肿瘤治疗的， 又可称溶瘤病毒，是一种有效的肿瘤基因治疗载体。增殖型腺病毒利用肿瘤与正常组织细胞问结构及代谢 途径的差异，靶向性地在肿瘤细胞内复制增殖，最终裂解肿瘤细胞，同时还能长效表达抗肿瘤的外源基因。 增殖型腺病毒具有可复制、体积小、弥散能力强等优点_l ]。但由于增殖腺病毒能在体内复制，因此严格的安 全性对其临床应用是至关重要的。为了提高病毒感染的特异性和提高病毒在肿瘤组织内部的扩散能力，近 年来提出了肿瘤增殖病毒这一新型的肿瘤治疗策略。钱其军实验室已成功构建由端粒酶逆转录酶基因启动 子调控的CNHK300系统及由端粒酶逆转录酶基因启动子和缺氧反应元件启动子双调控的CNHK500系 统，体内和体外实验均取得了较好的治疗效果 ]。在CNHK500基础上，他们进一步缺失EIA区的24 bp， 开发出特异性更高的三调控增殖腺病毒SG600系统。IL24又称为黑色素瘤分化相关基因7(mda7)，主要是 因为IL24最初发现于黑色素瘤内。它是一种广谱的抗肿瘤基因，能抑制多种肿瘤细胞生长，并诱导肿瘤细 胞凋亡，包括前列腺癌、鼻咽癌、神经胶质母细胞瘤、宫颈癌、骨肉瘤、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌 等_7]。II 24对细胞生长的抑制作用具有选择性，它对大多数肿瘤细胞有较强的抑制作用而对正常细胞无影 响，而且这种作用不依赖p53、Rb和pl6等抑癌基因_7]。此外，IL24还可抑制肿瘤的血管形成，刺激外周血 单核细胞分泌II 一18、INF一7、II 一6、TNF一0：、II 一12、GM—CSF等细胞因子，发挥免疫修饰作用【 ]。 笔者将IL24表达框(包括人巨细胞病毒启动子、II 24基因和SV40 PolyA)插入到SG600系统，构建由 收稿日期：2007—10—12 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：那曼丽(1982一 )，女，满族，吉林长春人，硕士研究生，目前从事肿瘤基因治疗的研究。 浙 江 理 工 大 学 学 报 2008年 第25卷 端粒酶逆转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600一II