必修三：4.2种群的数量变化汇编.ppt

血细胞计数板(血球计数板) 方法名称： 使用范围： 显微计数(抽样检测) ①调查细胞数量时； ②肉眼看不见的细菌、酵母菌等微生物 问题一：怎样进行酵母菌的计数？ 1、血球计数板的结构 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的，玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。 大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，即1mm×1mm×0.1mm，其容积为0.1mm3； 大方格 中方格 小方格 16 （中格）×25 （小格） 25（中格）×16（小格） 3、血球计数板的分区与分格 不管计数室是哪一种构造，其每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。 2、计数 16×25型： 一般取四角的四个中方格（100个小方格）计数 25×16型： 一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。 3、计算 b表示培养液稀释倍数；用所数小方格中细胞总数/所数小方格数是为求得每个小方格中的细胞平均（总）数。 以1mm×1mm×0.1mm型为例 计数室容积为0.1mm3，则每个小方格的容积为1/4000mm3 酵母细胞个数／1mL =100个小方格酵母菌细胞总数/100×400×10000×稀释倍数 例1 通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有?? ?? 个。 2×108 5×400×10000×10= 例2 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1 mm3。 现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 个／mL。 5n×105 水样中蓝藻数量= 80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数=n×5×10000×10=5×105n． 例3 在用血球计数板（2mmx2mm方格）对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个方格内（盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此估算培养液中有酵母菌 个 解析：该血球计数板内培养液 =2mmx2mmx0.1mm=0.4mm3= 4x10-4ml, 则10ml培养液中酵母菌的数目=10x16x50/(4x10-4)=2x107 4、血球计数板的使用方法步骤 ③ 计数： 稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。 ① 镜检计数室： 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。 ② 加样品： 将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去。 ——从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。 问题二：从试管中吸出培养液进行计数之前，应该将试管轻轻震荡几次，为什么？ 一个小方格内酵母菌过多，难以数清,应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。 具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4～5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。 问题三：如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应当采取怎样的措施？ ——对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。 问题四：对于压在小方格界限上的酵母菌，应当怎样计数？ 1、从试管中吸取培养液进行计数之前，要先将试管轻轻振荡几次，是什么原因？