实验九 微生物的诱变.pptVIP

* 实验九 微生物的诱变育种 1.1 掌握紫外线诱变育种的原理和方法。 1.2 掌握用平皿法测定淀粉酶活力方法 。 1 实验目的 2.1 紫外线是一种常用的物理诱变剂，其作用机理是什么? 2.2 平皿法为什么能测定淀粉酶活力? 2 实验原理(通过了解下列问题来掌握 98实验原理) UVL VL Photolyase 紫外线诱变的分子基础 3 材料与方法 3.1.1 培养基：淀粉培养基（固体）、LB液体培养基。 3.1.2 仪器：恒温培养箱、超净工作台、紫外灯（15W）。 3.1.3 菌种： Bacillus subtilis 3.1.4 其它物品：碘液、无菌生理盐水，盛4.5mL 无菌水试管。 3.1 实验器材 3.2 方法 3.2.1 菌悬液制备。将菌株活化48 h后，挑取单菌落与无菌生 理盐水混合，并用生理盐水调至0.5 McFarland单位，即为 1-2×108 CFU/mL的菌悬液浓度。 3.2.2 倒平板。制作淀粉培养基平板9套/组。 3.2.3 标记。将平板按稀释度和处理时间作好标记。 紫外线诱变的操作步骤 3.2.5 稀释。在红灯下按10倍稀释法将处理0、1、3 min的菌悬液 稀释成10－1～10－6 。 3.2.6 涂平板。在红灯下取3个不同处理时间的10－3 、 10－4 、 10－5 3个稀释度菌液0.1mL分别涂一套平板 。 3.2.4 紫外线处理。在黑暗下，开启紫外灯预热20 min,取无菌 平皿2套,各放入大头针一枚,置磁力搅拌器上找开皿盖,在距离 30cm下分别照射1 min和3 min 。 3.2.7 培养。用双层报纸将平板包扎好，置37℃下培养48 h 。 *