SD大鼠颊粘膜鳞癌细胞系的建立及其生物学特性的研究.pdfVIP

sD大鼠颊粘膜鳞癌细胞系的建立及其生物学特性的研究 中文摘要 目的：建立SD大鼠L]腔颊粘膜鳞状细胞癌细胞系，对其生物学特性进行观察和鉴 定，为口腔癌的致病机制、诊断和治疗研究提供一个有用的细胞模型。 入饮水喂养SD大鼠，诱发其颊粘膜鳞状细胞癌；切取颊癌组织行病理诊断，同时 做组织块原代培养；利用胰酶消化法和细胞克隆培养法筛选细胞。②相差显微镜、 微分干涉显微镜观察活细胞彤态；HE染色、透射电镜、扫描电镜等方法，观察固定 clode 法检测单细胞的增殖能力(每25cm2培养瓶接种300个细胞，2周后固定、染色)。 采用流式细胞仪检测细胞周期；分别计数J00个第2l和65代细胞的染色体条数， 分析研究细胞的染色体倍性。采用TRAP—ELISA法检测肿瘤细胞和正常粘膜细胞端 天后处死动物，计算裸鼠实验性肺转移率，并行组织病理学诊断，以观察细胞的体 内成瘤和转移特性。④取裸鼠皮下移植瘤的组织块接种于其它裸鼠皮下，在裸鼠问 连续传5代，观察皮下接种的各代组织块成瘤速度；裸鼠实验性肺转移组织块原代 培养，培养细胞再行裸鼠尾静脉注射，连续裸鼠体内传5代筛选亚细胞系，并与母 本细胞比较生物学特性，称量并计算各代裸鼠肺重／体重比值。⑤将SD大鼠按周龄 均分别在口底或颊部原位和皮下接种SDSCC—B细胞及其裸鼠移植瘤组织块。口底、 颊部原位按种5×106个细胞(100}|t1)，皮下接种1×107个细胞(20091)，分别饲养 统计学分析。 结果：@4NQO诱发36周后，SD大鼠颊粘膜形成肿瘤，病理诊断为颊粘膜鳞状上 皮细胞癌；组织块原代培养的细胞为混合生长的细胞，主要包括两大类～一上皮样 细胞和成纤维样细胞；经筛选培养后获得单一纯化的上皮细胞，至2005年3月20 日，已体外连续传】05代，维持培养时间为11个月零22天，细胞生长稳定。将该 ratbuccalmHCOS8 Daw}ey 细胞系命名SD大鼠颊粘膜鳞状细胞癌细胞系(Sprague OellCSrCinomace]1 SqUgIflOHS 胞，符合鳞癌细胞的形态学特征；免疫组化染色结果为CK和Vim阳性。细胞群体 倍增时闯为26h，两代细胞的群体倍增时间之间无显著差异(P0．05)。克隆形成率 并保持稳定。端粒酶活性检测结果显示：SDSCC—B细胞端粒酶活性为阳性，sD大 鼠正常颊粘膜细胞端粒酶活性为阴性。③裸鼠皮下接种成瘤率为100％(16／16)；裸 鼠实验性肺转率为100％(10／lO)；皮下肿瘤和肺内结节病理检奄结果均为典型的鳞 状细胞癌，与SD大鼠颊粘膜形成的肿瘤病理诊断结粜相同。④裸鼠皮下接种的5 代组织块成瘤速度逐渐增加，第4和5代组织块成瘤至直径lcm所需的时间比第l 代短，差别具有统计学意义(PO．05)。细胞连续裸鼠胂内传5代后，筛选到业细 胞系SDSCC—BL，各代裸鼠肺重／体重的比值逐渐升高，差别具有统计学意义(P 0．01)。⑤细胞或组织块原位或皮下接种于4组SD大鼠，分别观察6、4、4、3个月 后，均无移植瘤形成。 结论：成功建立4NQO诱发的SD大鼠颊猫膜鳞状细胞癌细胞系；经过体外连续传 代培养，细胞形态、生长状况、染色体众数、端粒酶活性保持稳定：裸鼠皮下接种 成瘤率高，尾静脉注射肺转移率高。该细胞系是研究1：5腔鳞痛分子发生机制和预防 策略的又一模型。 硕士研究生冯元勇(口腔颌面外科学) 指导教师 李宁毅教授 陈万涛教授 贾暮云副教授 关键词：SD大鼠；颊癌；细胞系；移植瘤：模型 CellLineinSDRatandIdentificationofTheir EstablishmentofBuccalSCC Biological Characters Abstract a li