细胞毒活性测定法三.pptVIP

第一节　生物学测定方法 一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法 二、细胞毒活性测定法 三、抗病毒活性测定法 四、趋化活性测定法 五、生物学活性测定方法学评价 第三节 细胞因子与细胞粘附分子测定的临床应用 一、临床应用原则 二、特定疾病诊断的辅助指标 三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后 是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。 TNF-α和TNF-β与同一受体结合，故两者生物学活性相似 用TNF-α与TNF-β特异性中和抗体作阻断试验，以区别两类TNF TNF活性测定靶细胞：小鼠成纤维细胞株L929、L-M、WEHI164.13 注意： 若选用L929细胞，其不宜生长过密。 细胞被某种因素激活后，代谢增强，线粒体脱氢酶活性也增强， 着色也会加深。 MTT染色时，必须考虑待检样品中有无激活靶细胞的因素。 1．细胞因子和细胞粘附分子的特性是什么？可分为几类？ 2．基于促进细胞增殖生物学活性，检测IL-1、IL-2、IL-3、TNF等方法所使用的细胞依赖株与检测原则是什么？ 3．细胞因子生物活性测定法的种类，各用于哪些细胞因子的检测，主要优缺点？ 4．ELISA法在细胞因子和粘附分子检测可应用于哪些方面？ 5．ELISPOT的原理、用途、与ELISA的异同是什么？ 6．在应用流式细胞术分析细胞因子时，需要哪些靶细胞活化剂？各自的作用是什么？ 7．与细胞因子的生物活性测定法相比，免疫测定法的优势是什么？如何看待其现有的劣势？试推测解决现存的不足和改进方法的可能途径。 8．在临床疾病诊断中，检测细胞因子和粘附分子的意义是什么？应用细胞因子检测方法的原则有哪些？ 9．如何利用细胞因子检测来判断Th1/Th2细胞平衡？ 10．如何从细胞因子检测的角度，了解机体T细胞、巨噬细胞等细胞的功能？ 细胞因子和粘附分子是构成免疫应答的重要物质基础，检测这些分子可反映机体的免疫状态。 细胞因子或粘附分子的检测方法包括生物学测定法和免疫测定法两大类。 细胞因子和粘附分子检测的临床意义。对某些特定疾病具有诊断价值；对细胞因子治疗具有监测和指导用药的意义；对机体的免疫状态具有评价作用。 细胞因子的检测方法多种多样，各有利弊。 高敏感性方法：特异性的降低、废弃物难处理 活性测定方法：定性试验 基因分析法：利于细胞内定位分析、操作烦琐 （一）方法的联合应用 常用临床标本：抗凝全血，并分离获得单个核细胞 炎症局部细胞因子的水平：局部分泌液 细胞因子或粘附分子的细胞内定位检测：相应细胞 相应细胞因子的基因和mRNA表达：相应细胞 疗效观察和预后判断：疾病急性期和恢复期双份标本进行动态观测 免疫荧光染色和流式细胞分析：注意待检细胞的活性和状态，以保 证结果的特异性 （二）标本的适当选取 意义： 细胞因子具有网络调节的状调节的特点 级联效应或相互抑制作用的网络系统。 有助于提供有效的疾病诊断和机体免 疫状态信息 举例： T细胞、巨噬细胞和上皮样细胞分泌相应细胞因子的 功能：IL-1、 IL-2、IFN-γ和GM-CSF Th1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ （三）细胞因子的联合检测 二、特定疾病诊断的辅助指标 许多疾病过程均可出现粘附分子和细胞因子表达的异常改变，高表达、低表达或是缺陷均可与某些特定疾病密切关联，同时还可反映疾病的进程 （一）细胞因子检测在特定疾病诊断中的意义 （二）粘附分子检测在特定疾病诊断中的意义 粘附分子有可溶性和膜结合性两种形式，均与机体的免疫状态和疾病的发生有关，在炎症、肿瘤转移和器官移植排斥反应中发挥着重要的作用。相关粘附分子的检测有助于此类疾病的诊断。 三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后 机体免疫应答的强弱可通过细胞因子或粘附分子的表达水平来反映，其过高或过低表达均系免疫调节异常的结果 细胞因子和粘附分子的水平，作为观察治疗效果和判断预后的重要指标 接受治疗的患者进行细胞因子水平的监测，对保证治疗效果具有指导意义 。 思考题 小 结 * * * * 第十六章 细胞因子与细胞粘附因子的测定 第二节 免疫测定方法 一、ELISA方法 二、流式细胞分析法 三、酶联免疫斑点试验 四、免疫学测定方法学评价 思考题 小结 细胞因子 细胞粘附因子 是介导细胞间及细胞与细胞外基质间粘附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞膜表面表达和可溶性两种形式存在。 第一节 生物学测定方法 1.