氨基酸、多肽和蛋白质-授课版.pptVIP

* * * * * * * * * * 串联质谱测定蛋白质序列信息示意图 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2.1 天然存在的多肽 谷胱甘肽 微生物中的多肽 动物激素类多肽 商业合成的二肽：天冬甜素，人造甜味剂 三、蛋白质 3.1 蛋白质的元素组成 含C、H、O、N，多数含S，有些含P、I及Fe、Cu、Mn、Zn等。组成上的显著特点：含N量较高且恒定（为16%左右） 蛋白质含量%=含氮量/16%=含氮量×6.25 3.2 蛋白质的分类 3.2.1 简单蛋白质：只由氨基酸组成，其水解产物全部为氨基酸。又可再分为7类 种类 性质 分布 举例 清蛋白 分子量小，溶于水和稀盐溶液 一切 动植 物中 血清清蛋白、卵清蛋白、麦清蛋白 球蛋白 不易溶于水，但易溶于稀盐溶液 血清球蛋白、免疫球蛋白、大豆球 蛋 白 谷蛋白 不溶于水、盐溶液及醇中，但溶于稀酸稀碱 谷类 种子 中 米、麦、谷蛋白 醇溶蛋白 不溶于水、盐溶液，可溶于稀酸稀碱和70%乙醇中 玉米蛋白、小麦胶体蛋白 精蛋白 溶于水、稀盐及稀酸，为分子量小、结构简单的碱性蛋白质 动物体 内 鱼精蛋白 组蛋白 同上 动植物 体内 染色体的组蛋白、动物胸腺组蛋白 硬蛋白 不溶于水、稀盐稀酸稀碱及有机溶剂中 毛、发、甲、骨及筋腱等组织中 角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白 3.2.2 结合蛋白质：简单蛋白质 + 非蛋白质组分(辅基或辅酶) 可再分为6类: 蛋白质→蛋白 →蛋白胨→多肽→二肽→氨基酸 不完全水解 完全水解 水解方法 操作 优点 缺点 碱法 加6mol/LNaoH，密封于小试管，110℃水解若干小时 ①完全水解或不完全水解 ②Trp不被破坏, ③水解液较清亮 ①水解作用强烈,大部分氨基酸被破坏, ②有外消旋作用 酸法 加5,7Mol/LHCl,密封于小试管,110℃水解若干小时 ①能完全水解, ②大部分氨基酸不被破坏, ③不发生外消旋. ① Trp被破坏, ②Asn.Gln脱去酰胺氨基, ③水解液呈黑色. 酶法 蛋白酶酶解样品 ①氨基酸不被破坏, ②不发生外消旋, ③水解条件温和. ① 水解不完全, ②不宜用来制备分离氨基酸。 3.3 蛋白质的水解 3.4 蛋白质结构的四个层次： 一级（Primary）、二级（Secondary）、三级（Tertiary）、四级（Quaternary） 3.5.1 盐析法 3.5.2 透析法（dialysis） 3.5 蛋白质的分离纯化 3.5.3 柱层析法（Column chromatography） 离子交换柱层析法（ion-exchange chromatography） 凝胶柱层析法（Gel chromatography）或大小排阻层析法（size-exclusion chromatography） 亲和层析法（affinity chromatography） 3.5.4 电泳法分离和分析蛋白质 SDS测定蛋白质分子量 等电聚焦（isoelectric focusing） 一些蛋白质的等电点 双向电泳 假定的酶纯化表 活性（activity）与比活性（specific activity） 蛋白质酶的活性与比活性 Edman化学降解法： ① 拆开二硫键(用β-巯基乙醇还原、碘乙酸 修饰)，分离纯化肽链； ② 测定肽链的氨基酸组成； ③ 测定肽链的N端和C端； ④ 用两种或两种以上的方法将肽链断裂，建 立二组或二组以上具有不同链长的肽段； ⑤ 分离纯化各肽段，测其氨基酸排列顺序； ⑥ 进行重叠排列，确定肽链的一级结构。 3.6 蛋白质一级结构的测定 打开二硫键的方法 过甲酸氧化法 二硫苏糖醇还原法 丹磺酰氯 二甲基氨基萘磺酰氯 比DNFB更灵敏的N端氨基酸残基检测试剂 断开多肽链的一些常用方法的专一性