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　　研究捷安肽素抗真菌作用机理论文 【摘要】 目的 研究捷安肽素的抗真菌作用机理。方法 采用形态学方法和同位素标记法。显微形态观察经捷安肽素处理后的供试真菌的形态学变化。进一步采用14C同位素标记的特异底物“尿苷二磷酸-（14C）-葡萄糖”示踪，研究捷安肽素对真菌(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶活性反应的影响。结果 显微形态观察表明，经捷安肽素处理后，供试真菌呈现球形膨胀，而且随着捷安肽素作用强度增强，球形膨胀的程度和发生频率也增加，提示捷安肽素的作用位点在真菌细胞壁。同位素标记实验表明，捷安肽素可抑制（1,3）-β-D-葡聚糖合成酶的活性.freelechanism of Jiean-peptide.Methods The mode of action of Jiean-peptide against 4 phytopathogenic filamentous fungi associated gossypii,South oxysporum f.sp.vasinfectum ethod of morphology and isotope labelling.The (1,3)-β-D-glucan synthase assay ade the hyphal expanded and globular.The(1,3)-β-D-glucan synthase assay sho gossypii Southechanism of Jiean-peptide e activity of(1,3)-β-D-glucan synthase. Key echanism；(1,3)-β-D-glucan synthase 捷安肽素是一种由芽孢杆菌产生的抗真菌活性多肽，具有广谱抗真菌活性，而且稳定性好、抑菌持久，具有很好的开发前景［1，2］。从捷安肽素对疫霉菌、辣椒炭疽病菌、灰霉菌、棉花枯萎病菌等多种常见重要植物病原真菌的抑菌性能可知，捷安肽素可以通过抑制真菌孢子萌发、菌丝生长而发挥抗真菌生长作用。形态观察发现，捷安肽素可以破坏真菌的细胞壁结构，使真菌细胞呈现原生质球状［3］。（1,3）-β-D-葡聚糖合成酶（EC2.4.1.34；尿苷二磷酸-葡萄糖/(1,3)-β-D-葡聚糖-3-β-葡糖基转移酶）是一细胞膜结合酶，在细胞膜内侧聚合UDPG形成葡聚糖纤维，葡聚糖纤维分泌出细胞膜形成网状支架，对真菌细胞壁的完整性及保护真菌抵抗低渗透压起重要作用［4，5］。本文作者采用形态学方法和同位素标记法研究捷安肽素对真菌细胞壁及其（1,3）-β-D-葡聚糖合成酶的作用，进一步深入探讨捷安肽素的抗真菌作用机理，为捷安肽素的进一步开发提供理论基础。 1 材料 1.1 菌种 疫霉菌（Phytophthora sp.）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum gossypii South oxysporum f.sp.vasinfectum），均为本实验室保藏菌种。 1.2 培养基 马铃薯葡萄糖液体培养基。 1.3 主要试剂 捷安肽素原液（生物效价为19.5 mm）由本实验室提供；尿苷二磷酸-（14C）-葡萄糖［UDP-（14C）-G］，Perkin-Elmer进口产品；2,5-二苯基 唑（2,5-Di-phenyloxazole,PPO），Fisher进口产品。（捷安肽素的生物效价采用管碟法［2］测定，以疫霉菌为检验菌株，以抑菌圈直径为效价指标）。 1.4 主要溶液 粗酶提取缓冲液5×10-2mol/L Tris-HCl pH7.5,1mol/L葡萄糖，1×10-3mol/L EDTA，5×10-3mol/L MgCl2,1×10-2mol/L NaF,层析展开剂95%乙醇,1mol冰醋酸（7∶3，V/V）,闪烁液1g PPO，200 ml甲苯。 1.5 主要仪器 SHZ-82大容量回旋振荡器 德国ZAISS,AXIOPLAN2型多功能显微镜,PHS-3精密数显酸度计Sigma 3K30高速冷冻离心机,FJ-353G1型双道液体闪烁计数器等。 2 方法 2.1 捷安肽素作用下供试菌的形态观察 将疫霉菌、辣椒炭疽病菌、灰霉菌、棉花枯萎病菌接种于马铃薯液体培养基(终孢子浓度为106个/ml)，25℃150 r/min振荡培养48 h。每隔2 h取样，用0.05%的乳酚蓝染色液对样品进行固定、染色、显微观察孢子萌发情况和菌丝生长情况。设置3个实验组，捷安肽素的处理浓度分别为原液浓度、1/2原液浓度和空白对照。 2.2 捷安肽素样品的处理 将捷安肽素样品分为两组，组Ⅰ不做任何处理,生物效价为19.5 mm；组Ⅱ用30%的NaOH调pH为10，再以15%的HCl调pH为7.5，生物效价为