真核表达质粒pVAX1的应用论文.docVIP

　　真核表达质粒pVAX1的应用论文 曲云鹏，刘建国，杨德琴 【关键词】 pVAX1；DNA疫苗；质粒 从20世纪90年代DNA疫苗诞生以来，其在医学领域已取得长足的进步和发展，它的出现为预防感染性疾病的发生提供了一种新思维、新方法。但是，目前在DNA疫苗中所应用的载体质粒仅局限于实验室研究和动物实验，如何使DNA疫苗应用于人体实验，最终走向临床研究.freelRNA水平比较了正常组织和肿瘤组织，发现钙离子激活氯化物通路2（CLCA2）是大多数肿瘤细胞所共有的抗原。通过RT-PCR可扩增出编码CLCA2主要功能蛋白的基因片段，利用分子克隆技术分别将三段基因克隆到pVAX1，构建多个重组质粒，通过脂质体转染293璄BNA细胞，诱导其在真核细胞中成功表达，为研制新型抗癌疫苗打下了基础。并不是所有的共同多价抗原都适合用于基因疫苗。Smith等5 利用PCR技术扩增出编码黑色素瘤多价抗原表位的基因片段，利用分子重组技术与pVAX1结合构建真核表达质粒。通过转染COS7细胞进行体外攻击实验观察到，初次免疫时细胞毒性T淋巴细胞可以产生多种抗体，而再次免疫只能产生一种抗体，提示有免疫耐受现象出现。对于一些组织来源和发生比较特殊的肿瘤，DNA疫苗也达不到理想的效果。Margot6将与肿瘤密切相关的细胞表面黏附分子CD44外显子V2的编码基因，克隆到pVAX1中构建的pVAX1璙2注入淋巴瘤动物模型体内，未在动物体血清中检测到特异性抗体，没有预期的治疗效果，且在胸腺内发现癌转移灶，可能是由于淋巴瘤本身来源于免疫系统，有着特殊的免疫逃逸机制，并且能诱导机体产生免疫耐受，一般抗原呈递细胞不能将其识别。另外，肿瘤DNA疫苗常常由于给药途径不理想，造成其表达不充分，达不到满意的效果。有学者利用黑色素瘤细胞表面主要抗原蛋白——酪氨酸相关蛋白2(TRP-2)的编码基因，构建真核表达质粒pVAX1-C(SVYD)C和pVAX1-C(TAYR)C，通过电穿孔的方法攻击动物模型，2个月后发现实验组动物肺内转移灶明显少于对照组，或者没有，从脾脏和外周血中获得大量CD8＋T淋巴细胞7。该研究成果为探索肿瘤DNA疫苗用药途径提供了新的方法。 2.2 口腔疾病防治研究 牙周炎是世界范围内的疾病，是成年人丧失牙齿的主要原因。牙龈卟啉单胞菌（Pg）是牙周炎的主要病原菌，编码基因rgpA表达的多肽是Pg主要的酶促反应区和血细胞凝聚反应区，是牙龈卟啉单胞菌（Pg）的主要毒力因子。YonezaRNA，ol Reprod Dev,2004,68(2):182-188. 2 Huntley JF, Stabel JR, Paustian ML,et al.Expression Library Immunization Confers Protection against Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Infection J.Infection And Immuntity,2005,73(10):6877-6884. 3 Ma CH, Zhang Y, eyer RG,et al.Identification of HLA-A 0201-Restricted T Cell Epitopes Derived from the Novel Overexpressed Tumor Antigen Calcium-Activated Chloride Channel 2J.Immunology,2002,169:540-547. 5 Smith SG,Patel PM,Porte J,et al.Human Dendritic Cells Ge- ically Engineered to Express a Melanoma Polyepitope DNA Vaccine Induce Multiple Cytotoxic T-Cell Responses J.Clinical Cancer Research,2001,7:4253-4261. 6 Margot Z.Unexpected induction of unresponsiveness by vac- cination ed Salmonella typhimuriumJ. Immunotherapy,2002,25(2):162-175. 7 Kalat M, Kupcu Z, Schuller S,et al.In Vivo Plasmid Electroporation Induces Tumor Antigen-specific CD8+ T- Cell Responses and Delays Tumor Groa ModelJ. Cancer Res, 20