登革病毒感染对人血管内皮细胞PGIS表达及PGI2分泌的影响论文.docVIP

　　登革病毒感染对人血管内皮细胞PGIS表达及PGI2分泌的影响论文 .freelan vascular endothelial cells Abstract AIM: To elucidate the effects of Dengue virus on the expression and secretion of prostacyclin (PGI2) in endothelial cells. METHODS: Cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) ined by radioimmune assay. Cytoplasmic RNA of the infected HUVEC ethod and ote the expression of PGIS mRNA in HUVEC and increase the level of PGI2, ay increase the vascular permeability. The dysfunction of vascular endothelial cell （EC） induced by DV may be related to the pathogenesis of Dengue haemorrhagic fever （DHF）and Dengue shock syndrome（DSS）. KeyRNA的水平; 分别收集病毒感染的上清液, 用放射免疫检测法测定PGI2 的含量。结果: 登革病毒感染可使PGIS mRNA 的水平增高, 导致HUVEC分泌PGI2的量明显升高。在病毒感染后48、 72、 96 h, 与对照组比较HUVEC表达PGIS mRNA的水平和HUVEC 分泌PGI2 的量明显升高(P 0.05)。结论: DV2感染可显著上调HUVEC中PGIS mRNA 转录及PGI2 的分泌,.freelorrhagic fever, DHF)或登革休克综合征(Dengue shock syndrome, DSS)则很危险。DHF/DSS最突出的特征是, 血管渗漏、 出血, 系由于广泛的毛细血管渗透性增加所致。血管损伤的确切机制尚不完全清楚, 但诸多研究显示与血管内皮细胞的结构和功能变化密切相关。在体外, DV可感染内皮细胞, 使之释放多种血管活性物质1, 2。研究表明, DHF患者在低血压危险期PGI2有过度升高的趋势。另外, 血清中血栓素TXA/PGI的比值的下降程度也与登革病毒感染的严重程度相关3, 4。但体外DV对内皮细胞分泌的血管活性物质PGI2的影响尚未见报道。本研究中应用DV2体外感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后, 观察了DV对HUVEC表达PGI2的影响。 1 材料和方法 1.1 材料 DV2标准株(Nea公司产品。 1.2 方法 1.2.1 HUVEC的培养 按文献5建立的方法进行。取新生儿脐带用1.25 g/L胰酶/0.1 g/L EDTA消化液灌注消化法, 从脐静脉中分离HUVEC。离心沉淀后, 加入含200 mL/L FCS的培养液(200 mL/L FCS、 RPMI1640培养液、 Hepes 5 g/L、 L谷胺酰胺30 mg /L、 青霉素1×105 U/L及链霉素100 mg/L), 接种于25 cm2 培养瓶中, 在37℃、 50 mL/L CO2培养箱内培养。3 d后待细胞贴壁生长至汇合状态, 用1.25 g/L胰酶/0.1 g/L EDTA液消化传代。选择生长状态良好的第2、 3代细胞进行实验。用免疫组化染色（ABC法）检测胞质中第Ⅷ因子相关抗原的表达。 1.2.2 DV2 对HUVEC 的感染性 将HUVEC接种到24孔板中, 细胞密度为5×107/L, 每孔加1 mL, 于37℃培养24 h后感染病毒。每孔接种经预先滴定的约为5×105 pfu的DV2, 使DV2的感染复数（multiplicity of infection, MOI）为10 pfu/细胞, 于37℃吸附2 h。弃感染上清, 用含40 mL/L小牛血清的RPMI1640培养液洗2遍, 每孔加入该培养液0.5 mL, 阴性对照孔中加入RPMI1640培养液, 于37℃、 50 mL/L CO2培养箱中培养。分别收集病毒感染后6、 12、 24、 48、 72和96 h的HUVEC, 制成细胞抗原片, 用间接免疫荧光法检测DV抗原阳性的HUVEC。 1.2.3 细胞活力的检测 将含有HUVEC的培养液(1×107细胞/L)分别加入5块96孔板中的24孔内, 每孔100 μL, 培养24 h后感染病毒。每孔接种经预先滴定的约为1×104 pfu的DV2, 使之MO