白头翁对体外培养阴道毛滴虫蛋白质差异表达的影响论文.docVIP

　　白头翁对体外培养阴道毛滴虫蛋白质差异表达的影响论文 张琼，黄慧聪，梁韶晖，潘长旺 【摘要】 目的 ：寻找阴道毛滴虫的特异蛋白质并探讨白头翁对其蛋白质差异表达的影响。方法：用固相pH梯度二维凝胶电泳分离阴道毛滴虫总蛋白，凝胶用银染显色，PDQuest7.4.0软件分析。结果：正常对照组找到蛋白质点平均（435±17）个，匹配率为92.5%；白头翁组找到蛋白质点平均（343±9）个，匹配率为94.9%。定性分析.freelonas vaginalis（T.v）and explore the influence of Pulsatilla chinensis on discrepancy protein expression. Methods: The proteins of T.v mobilized pH gradient-based tensional gel electrophoresis(2-DE). After silver staining， PDQuest 7.4.0 softages. Results:About 435±17 and 343±9 protein spots aps of normal group and Pulsatilla chinensis group，respectively：The match ratio al group and Pulsatilla chinensis group al group， 13 protein al group al group and Pulsatilla chinensis group are established ，and 151 different proteins are found. In the process of Pulsatilla chinensis kills T.v， the qualitative or quantitative change takes place in the above-mentioned protein. Key onas vaginalis；Pulsatilla chinensis；proteome；tensional electrophoresis 阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis Donne，1837)是一种寄生于男女泌尿、生殖道的鞭毛虫，可引起滴虫性阴道炎、前列腺炎和泌尿系统炎症1。滴虫病被认为是最流行的性传播疾病（STD）之一2-5。研究表明，白头翁具有明显的杀灭阴道毛滴虫作用，0.625～5 mg/mL浓度的药物对滴虫均具有抑制、杀灭和裂解作用6，但药物杀虫机制中对虫体蛋白质组表达的影响尚未见报道。阴道毛滴虫全基因组序列已于2007年公布。目前，国外关于阴道毛滴虫全虫可溶性蛋白的二维电泳图谱已有报道7，而用药前后的差异蛋白质组学研究尚未见报道。本研究采用二维电泳技术，比较正常死亡组和白头翁作用死亡组阴道毛滴虫蛋白质表达的差异，为从蛋白质水平初步探索白头翁体外抗阴道毛滴虫的杀虫机制奠定基 1 材料和方法 1.1 试剂 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、超纯尿素(ultraurea)、硫脲(thiourea)、3-3-(胆酰胺基丙基)二甲氨基丙磺酸盐(CHAPS)、四甲基乙二胺(TEMED)、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰氨、固相pH干胶条(17 cm，pH 4～7)、Bio-lyte pH 3～10、2-D clean up试剂盒等(Bio-Rad公司)；蛋白酶抑制剂混合液(Sigma公司)；所有溶液均用MilliQ水配制。 1.2 仪器设备 PROTEAN IEF CELL等电聚焦仪，PROTEANIIXi垂直板电泳仪及其附件，GS-800扫描成像系统，PDQuest凝胶图像分析软件(Bio-Rad公司)，UV722s紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。 1.3 虫体的收集 1.3.1 实验标本：虫体分离自温州东方女子医院阴道炎患者的阴道分泌物，参照文献8方法接种于肝浸汤培养基（pH 5.8），37 ℃无菌培养，24 h传代一次。 1.3.2 药物制备：白头翁20 g(购自温州医学院附属第一医院)，置400 mL双蒸水中，浸泡过夜，然后煮沸30 min，收集药液；再加水200 mL，继续煮沸30 min，取出药液并与首次药液混合，过滤除去残渣，加热浓缩至40 mL，药液生药浓度为500 mg/mL。3 000 r/min离心10 min，取上清，置无菌瓶中，4 ℃保存。 1.3.3 培养基：肝浸汤培养基，8磅20 min高压灭菌后4 ℃保存，培养前加10%灭活小牛血清及青霉素和链霉素各1 000 U/mL，分装培养管，每管培养基体积为5 m