热休克蛋白70与肝脏缺血预处理延迟保护效应论文.docVIP

　　热休克蛋白70与肝脏缺血预处理延迟保护效应论文 .freel-op-eration，S组）;②缺血再灌注组（ischemic reperfusion，I/R组）;③缺血预处理组（ischemic preconditioning，PC组）;④预处理加左旋硝基精氨酸组（preconditioning+L-NNA，PC+L组），各组再灌注后检测血清谷丙转氨酶（alanine aminotrans-ferase，ALT）及丙二醛（malondialdehyde.freelic preconditioning;heat shock proteins;is-chemia-reperfusion injury Abstract:AIM To assess the protection of HSP70’s and time course in the preconditioning（PC）in ischemia/reperfu-sion（I/R）injury in rat liver.METHODS 168SD rats ly divided into four groups:①S group:n=42，sham-operated control;②I/R group:n=42，subjected to ischemia for70min;③PC group:n=42，ischemia for5min and reperfusion for5min for tia;④PC+L group:n=42，the rats inistered L-NNA（10mg kg-1 ）before preconditioning，and then ia for70min.Serum level of alanine aminotransferase（ALT）and malondialdehyde（MDA）ical technique.RESULTS Serum level of ALT and MDA of both I/R and PC+L group increased，pared level of ALT and MDA e gradually higher than I/R group during6～48h（P 0.01）.CONCLUSION NO and HSP70might be involved in the protection against liver ischemia/reperfusion injury and HSP70might be associ-ated in，持续再灌注;③预处理后缺血再灌注组（PC组，n=42）:阻断肝门，缺血5min后再灌注5min，共重复2次后阻断肝门，缺血70min，持续再灌注;④预处理加L-NNA加缺血再灌注组（PC+L组，n=42），预处理前在门静脉注射L-NNA（10mg kg-1 ），然后与PC组同法，标本采集:再灌注后于0，1，3，6，12，24和48h取静脉血清及缺血部位肝脏组织标本，乙醇、甲醛液固定，每个时间点均为6只大鼠，每只大鼠只限取一次标本后处死. 1.3 模型制备方法 依照Kobayashi法建立大鼠肝脏局部缺血再灌注模型，每只大鼠手术前禁食12h，采用2g L-1 戊巴比妥钠30mg kg-1 腹腔内麻醉，正中剖腹，分离肝十二指肠韧带，暴露肝门部.S组不作进一步处理;所有缺血方法均为血管夹阻断门静脉进入肝脏第一次分叉以远，即阻断肝尾状叶及肝左叶血流，造成70%肝脏缺血，阻断达到所需的时间后，松开血管夹，进行再灌注. 1.4 指标检测 1.4.1 血清ALT，MDA的检测 下腔静脉血2mL常温1500r min-1 离心3min，取血清，用赖氏法测定ALT活性.比色法测定血清MDA含量. 1.4.2 肝组织热休克蛋白免疫组化染色 各时间点采集的肝脏组织标本均进行热休克蛋白70（HSP70）免疫组化染色;采用生物免疫组织化学染色法，苏木素复染，高倍镜下，细胞质呈棕色着染者为HSP70蛋白表达阳性细胞，观察切片中10个具有代表性的高倍视野，计算1000个肝细胞中（100个细胞×10个高倍镜视野）染色阳性细胞数除以1000作为HSP70蛋白表达阳性率. 1.4.3 形态学检查 剪取肝左叶组织1.5cm见方的组织块，用甲醛液固定，制成石蜡切片，进行HE染色，镜下观察组织结构.另外各组3，12和24h组织块固定后送电镜观察. 统计学处理:全部数据以x ±s表示，均数间比较用t检验，采用SAS统计软件分析. 2 结果 2.1 各组大鼠再灌注后血清ALT及MDA变化 再灌注后各个时间点I/R，PC，PC+L组血清ALT