BCA 法微量蛋白质浓度测定试剂盒Micro BCA Protein - 生工生物工程.PDFVIP

BCA 法微量蛋白质浓度测定试剂盒 Micro BCA Protein Assay Kit 品编号：C503061 包装规格：250 Assays/ 1250 Assays 品简介 BCA法是理想的蛋白质定量方 ，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与 Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正 比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高，操作简单，并且受干扰物质去垢剂等影响小。本试剂盒适用于 微量蛋白质浓度的测定。若采用分光光度法，标准曲 的 性范围为0.5-20 g/mL。若采用酶标板法，标准曲 的 性范围 h 为2-40 g/mL。 c 品特点 e 1. 适用于浓度比较稀的蛋白质样品的定量。 t 2. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。 3. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝， 性关系良好。o i 运输和保存条件 在常温下运输，收到后将溶液A 、溶液B和溶液C于4°C保存，BSA蛋白标准液-20°C，保质期一年。 B 试剂盒组成 n 组分 C503061 试剂 A o 60 mL 试剂 B 60 mL 试剂 C g 3 mL BSA标准溶液 5mg/mL n 2 mL 操作步骤 a A 试剂准备 1. 按照以下公式计算所需的BCA 工作液总体积。 ¸ BCA工作液总体积= （标准曲 测定点数+样品数）×重复次数×每个样品所需的BCA工作液体积 S 2. 根据所需的BCA工作液总体积，定量取溶液A ：溶液B：溶液C=25：24 ：1，混匀，制成BCA工作液。 3. 取一定量的BSA标准溶液，用1XPBS溶液稀释为40 g/mL。 4. 取9支1.5 mL离心管，按照下表平行操作，配制BSA浓度梯度。 溶液管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 蒸馏水 ( L) 1000 987.5 975 950 875 750 625 500 0 0.04mg/mL BSA ( L) 0 12.5 25 50 125 250 375 500 1000 BSA浓度( g/mL) 0 0.5 1 2 5 10 15 20 40 B. 分光光度法 1. 取22支1.5 mL离心管，分为标准组和样品组。其中18支1.5 mL离心管，每个标准品设置1个重复，各管分别加入500 L 相应浓度的标准蛋白质溶液；剩余4支1.5mL离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。其中编号不同的两管加 入浓度不同的500 L样品稀释液。 2. 各管加入0.5 mL BCA工作液，迅 混匀。 3. 在37°C水浴中保温60 min。 4. 冷却至室温后，在分光光度计上测各管的A562值，扣除空白对照。 5. 以标准组各管A562平均值为纵坐标，对应的蛋白质浓度为横坐标，在坐标纸上或Microsoft Excel 软件中绘制标准曲 。 6. 根据两个相同样品稀释液A