胆红素致L-02细胞生长及凋亡影响的研究.pdfVIP

目 录 胆红素致L-02 细胞生长及凋亡影响的研究…………………… ……………1 中文摘要 ……………………………………………………………………… 1 ABSTRACT …………………………………………………………………… 3 英汉缩略词对照表 ……………………………………………………………5 前言……………………………………………………………… …………… 6 1 实验材料与方法 …………………………………………………………… 9 1.1 主要试剂及材料………………………………………………………… 9 1.2 细胞培养………………………………………………………… ……… 10 1.3 主要试剂的配制方法 ……………………………………………………11 1.4 MTT 法检测胆红素对人肝细胞L-02 的生长抑制作用……………… 13 1.5 胆红素对人肝细胞L-02 凋亡的影响 …………………………………14 1.6 胆红素对人肝细胞L-02 Bcl-2 、Bax 蛋白表达的影响………………… 17 1.7 统计学方法 ……………………………… …………………………… 18 2 结果 ……………………………………………………… ………………18 2.1 胆红素对正常人肝细胞L-02 生长的影响 ……… …………………… 18 2.2 胆红素对L-02 细胞凋亡的影响…………………………………………19 2.3 免疫组织化学法检测Bcl-2 、Bax 蛋白的表达………………………… 20 附图 …… …………………… ……………………………………………… 22 3 讨论 ……………………………………………………………………… 27 3.1 胆红素对肝细胞的生长抑制………………………………………………27 3.2 胆红素对肝细胞的形态学影响 …………………………………………28 3.3 流式细胞仪测定胆红素致肝细胞凋亡作用………………… ………… 30 - 3 - 3.4 胆红素对人肝细胞Bcl-2 和Bax 蛋白表达的影响 …………………… 31 4 结论 …… ………………… ……………………………………………… 33 参考文献………………… ……………………………………………………34 综述…………………………………………………………………………… 38 攻读学位期间发表的学术论文目录………………………………………… 50 致谢…………………………………………………………………………… 51 - 4 - 胆红素致L-02 细胞生长及凋亡影响的研究 中 文 摘 要 目的：探讨不同剂量胆红素致正常人肝细胞 L-02 生长及凋亡的 变化。 方法：将不同浓度的胆红素（0 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L 、250mg/L 、300 mg/L ）作用于体外养的正常人肝细胞L-02，用 倒置显微镜观察其形态变化；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT ）法观察不 同浓度胆红素作用L-02 细胞24h 后的相对存活率的影响；不同浓度 胆红素作用24h 后，采用DNA 琼脂糖凝胶电泳；不同浓度胆红素作 用 12h 后流式细胞仪Annexin-V 和PI 双标等技术检测细胞凋亡率； 将 L-02 接种于 6 孔板中进行细胞爬片后,用同浓度胆红素作用24h, 多聚赖氨酸处理玻片做免疫组化染色检测Bcl-2 与Bax 蛋白的表达。 结果：在倒置相差显微镜下对正常人肝细胞 L-02 进行观察，对 照组细胞24h 形态无明显变化呈上皮型贴壁生长，细胞呈梭形或多边 形，低浓度(100 mg/L、150 mg/L)胆红素作用的细胞12h 内细胞细胞 贴壁良好，可见黄染；高浓度 （200 mg/L 、250mg/L 、300 mg/L)胆红 素作用的细胞2h 内形态无明显改变，4h 后可见细胞被黄染，较多细 胞突起、变圆，但细胞轮廓清晰，贴壁良好；6h 可见细胞轮廓不清， 少数细胞漂浮于培养基中；12h 可见较多细胞漂浮，并已开始崩解。 MTT 法显示胆红素作用后L-02 细胞的生长受到抑制，各组的OD 值 分别是0.