羊源产气荚膜梭菌的分离鉴定与α毒素的原核表达和免疫原性研究.pdfVIP

Isolation and Identification of Clostridiumperfringensin Sheep, and Prokaryotic Expression and Immunogenicity of Its Alpha Toxin A Dissertation Submitted to Shihezi University Shihezi University SShhiihheezzii UUnniivveerrssiittyy In Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Agriculture Master of Agriculture MMaasstteerr ooff AAggrriiccuullttuurree By LI Na By LI Na BByy LLII NNaa Dissertation Supervisor:Prof. WANG Zhi-cai Shihezi Xinjiang China Shihezi Xinjiang China SShhiihheezzii·XXiinnjjiiaanngg ·CChhiinnaa June, 2013 中 文 摘 要 目的：产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens，C.perfringens)是一种广泛分布于水 源、土壤等自然界以及动物肠道中的重要病原体，常导致人和家畜多种重要疾病，如： 人气性坏疽、食物中毒，牛羊猝死症、羊肠毒血症、羔羊腹泻、禽坏死性肠炎等。由 该菌引起的感染发病急、病程短、死亡率高，常给畜禽养殖业造成严重的经济损失。 因此，了解和掌握新疆羊源性产气荚膜梭菌主要流行毒素型和菌株耐药状况，开展毒 力基因的原核表达和免疫原性研究将为该菌感染的防治提供参考资料。 方法：本文对2010-2012 年新疆部分羊场送检病料进行涂片镜检、培养特性观察、 生化试验初步分离鉴定出产气荚膜梭菌。用PCR 扩增16S rRNA 序列，并进行序列测 定和同源性比对，对确定为产气荚膜梭菌菌株进行毒素分型，分析新疆地区主要流行 ( 毒素型。根据我国卫生部发布的厌氧菌抗微生物药物敏感试验方法 厌氧菌的抗微生 物药敏实验标准，2005)选取青霉素，盐酸克林霉素，甲硝唑，头孢曲松，替卡西林 等药物对产气荚膜梭菌临床分离株进行药物敏感性检测，了解菌株耐药状况。 GenBank X17300.1 α 参考 （登录号 ）已发表的产气荚膜梭菌 毒素的全基因序列，设 α PCR α 计针对 毒素成熟肽序列的引物，采用 方法扩增 毒素成熟肽序列，将其插入质粒 pET-28b pET-28b-cp