肉桂醛与盐酸小檗碱及其联合氟康唑抗白念珠菌作用的体外实验研究.pdfVIP

贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 肉桂醛与盐酸小檗碱及其联合氟康唑抗白念珠菌作用的体外实验研究 专 业: 病原生物学（微生物学） 研究生: 谭 心 导 师: 王 和 苑天红 摘 要 目的 探讨肉桂醛 （Cinnamic aldehyde ，CIN ）、盐酸小檗碱 （Berberine Hydrochloride ，BER ）单独和联合氟康唑（Fluconazole，FLC ）抗白念珠菌作用及其 机制。 方法 1. 参照体外药物敏感试验M27-A 方案及棋盘格法：①检测不同pH 值的培养基 及菌悬液浓度对药物 MIC80 （80%最低抑菌浓度）的影响；②检测肉桂醛、盐酸小檗 碱和氟康唑抗白念珠菌的作用，获得各药物单独抗菌时的MIC80 ；③检测肉桂醛、盐 酸小檗碱和氟康唑分别两两联合时，测定单药的MIC 联 （药物两两联合时，单药的抑 菌浓度）及药物联合作用时的部分抑菌浓度（Fractional inhibitory concentration ，FIC ） 及FIC 指数 （FIC index ，FICI ）。 2. 根据测定药物的MIC80 浓度及联合时的MIC 联浓度，进行实验分组。 3. 药物单独及联合作用白念珠菌后：①通过血清芽管形成实验，观察药物对白念 珠菌的芽管形成能力影响；②通过粘附人口腔粘膜上皮细胞实验，观察药物对白念珠 菌粘附人口腔粘膜上皮细胞的能力的影响；③通过蛋黄培养基，检测药物对白念珠菌 的细胞外磷脂酶活性的影响；④通过逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR ）技术及凝胶分析软件bandscan4.3 ，检测药物对 白念珠菌PLB1 基因的mRNA 表达水平差异。 结果 1. 药物对白念珠菌的作用为：① 在 pH 分别为：3.0、4.0 、5.0、6.0、7.0、8.0 和9.0 的RPMI 1640 培养基条件下，CIN 对白念珠菌的MIC80 值分别为：640、1280、 640、320、320、320 和 160μg/mL；BER 对白念珠菌的MIC80 值分别为：160、320、 160、80、80、80 和20μg/mL ；FLC 对白念珠菌的MIC80 值分别为：32、64、64、16、 2 3 4 5 16、16 和 4μg/mL 。当白念珠菌浓度分别为：5.0×10 、5.0×10 、5.0×10 、5.0×10 、 6 7 5.0×10 和5.0×10 CFU/mL 的条件下，CIN 对白念珠菌的MIC80 值分别为：40 、80、 2 贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 80、160、320 和320μg/mL ；BER 对白念珠菌的MIC80 值分别为：5、5、10、20、80 和80μg/mL ；FLC 对白念珠菌的MIC80 值分别为：2 、2 、4、4 、8 和 16μg/mL；② 肉 桂醛、盐酸小檗碱和氟康唑单独对白念珠菌的MIC80 分别为：320、80 和 16μg/mL； ③ 药物分别两两联合时：CIN （MIC 联=80μg/mL）与BER （MIC 联=20μg/mL）联合时 FICI≤0.5，CIN （MIC 联=80μg/mL ）与FLC （MIC 联=4μg/mL ）联合时FICI ≤0.5，BER （MIC 联=20μg/mL ）与FLC （MIC 联=4μg/mL ）联合时FICI≤0.5 。 2. 将实验分为：对照组 （无药物处理）及试验组CIN 80μg/mL、BER 20μg/mL、 FLC 4μg/mL 、CIN 320μg/mL、BER 80μg/mL