选3专题22-2-1动物细胞培养和核移植技术.pptVIP

1、无菌、无毒的环境 （培养液和用具的无菌处理，添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 1. 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 2. 接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。肿瘤细胞失去接触抑制。  动物细胞特点 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 归纳: 6、体细胞核移植技术存在的问题 克隆动物成功率低，产下的活体占移植克隆胚胎的比率平均不到10％ 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 知识点小结 练一练 1.在克隆羊的培育过程中，将雄羊的体细胞核移入雌羊的去核的卵母细胞中，产生该克隆羊的方式及该克隆羊发育成熟后所分泌的性激素依次是（ ） A.无性生殖、雄性激素 B.无性生殖、雌性激素 C.有性生殖、雄性激素 D.有性生殖、雌性激素 2.把甲牛体细胞的细胞核移入乙牛去核的卵母细胞中，发育到一定阶段植入丙牛的子宫内发育，则出生的小牛（ ） A.基因型与甲相同，性别一定与乙相同 B.基因型与乙相同，性别一定与乙相同 C.基因型与丙相同，性别一定与甲相同 D.基因型与甲相同，性别一定与甲相同 D * * * * 主讲：柯碧 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植技术 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 1、概念： 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 2、原理：细胞增殖 如何进行细胞培养?请阅读课本P44—46，思考下列问题 4、动物细胞培养条件 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶 氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的PH。 问题3：用什么方法将组织细胞分散成单个细胞？ 问题1：动物细胞培养选择什么材料容易成功？为什么选用它做动物细胞培养材料？ 动物胚胎或幼龄个体的器官或组织；因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 问题2：为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养和废物的排出。 问题4：为什么用胰蛋白酶处理？ 动物组织细胞间隙中的物质主要是蛋白质；并且动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，适宜胰蛋白酶作用 注意：控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 3、过程： 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞悬液 传代培养 原代培养 胰蛋白酶处理 贴壁细胞 原代培养细胞特点： 贴壁生长、接触抑制： 原代培养：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 传代培养： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理, 然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。（分瓶培养的过程） 传代10代以内，细胞正常生长，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，细胞增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化。 继续传代培养少部分细胞克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，传代培养的细胞能传到10-50代，其遗传物质没有发生变化。 细胞系： 一般传代50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 10代 细胞 部分细胞“癌变”，无限传代 动物细胞培养不能